CircRNA voorbereiding vereis lineêre RNA as voorgangermateriaal (RNA voorganger) vir sirkulasie, waar die RNA voorganger gewoonlik met behulp van lineêre plasmid DNA as transkripsiepatroon voorberei word en in vitro met behulp van T7 RNA-polimerase transkribeer word.
Hoogkwaliteit plasmid DNA is noodsaaklik vir in vitro transkripsie (IVT). Op grond van die volwasse plasmidvoorbereidingsdienstplatform kan Yaohai Bio-Pharma 'n hoë reenheid en standaardlineêre plasmid DNA (pDNA) voorbereidingsdienst aanbied om die integriteit van IVT-produkte te verseker.
Proses | Opsionele Diens | Diensbesonderhede | Leveringstydperk (werkdaag) |
Sirkulêre Plasmiedbereiding | Geensintese | Genusynthese (Derde party) | 7-10 |
Plasmidversterking | Plasmidversterking | 2 | |
Plasmidextractie | |||
Lineêre Plasmidvoorbereiding | Plasmidlinearisering en -reiniging | Plasmid-linearisering | 1 |
Linearisering van DNA-reiniging | |||
Plasmid DNA kwaliteit beheer | Konsentrasie en reinheid | Ultraviolette (UV) Spektrofotometrie | 1-2 |
Plasmidkonformasie | Agarose Gel Elektrofose (AGE) | ||
Kapillaire Elektroforesis (CE)-Opsioneel | |||
Plasmididentifisering | Beperkingsenoomidentifisering / AGE |
Vloekse seleksie van lineariseringmetodes
Optimalisering van DNA-onttrekings- en zuiveringmetodes om hoë herwinningstempo's te bereik.
Streng prosesbeheerstandaarde, met 'n superhelikale konformasiekoers van plasmidmonsters vir navorsing van meer as 80%.
Hoë standaard en hoë doeltreffendheid plasmidvoorbereiding en kwaliteitsbeheersdienste om eksperimentele behoeftes te voldoen.
Deur Yaohai Bio-Pharma se produk mCherry circRNA as voorbeeld te neem, is die supergekrulde verhouding van transkripsietemplaatplasmidsteekproewe (navorsingsgraad) meer as 70%, met 'n linearisasierate van byna 100%.
mCherry circRNA word met 'n gelineariseerde plasmid as templaat voorberei en in 293T-selle getransfereer. Hoë vlakke van fluoresensiexpressie (rooi fluoresensie) word na 24 ure transfusie opgemerk, wat na 48 ure versterk sal word, en kan steeds na 7 dae en 14 dae na transfusie opgespoor word.
mCherry-proteïen word vaste en doeltreffend uitgedruk, en die transkripsie-sjabloonreinheid kan die eis van circRNA-geneesmiddelprodukt (DP) met hoë kwaliteit deurstaan.
In vitro-uitdrukkingsvalidering van mCherry circRNA