Volgens die sentrale dogma is boodskapper-RNA (mRNA) die brug vir die oordrag van genetiese materiaal van DNA na proteïene.
mRNA speel 'n biologiese rol deur proteïene in vivo te kodeer, en volwasse mRNA in eukariotiese organisme bestaan uit vyf komponente: 5' Kap (kapstruktur), 5' UTR (nie-koderende gebied), die ORF (open leesraam), 3' UTR, en 3' polyA stert (polyadenylaatstert).
Proses | Opsionele Diens | Diensbesonderhede | Levertydperk (Dag) |
mRNA-Sekwensontwerp en -optimering | Ontwerp en optimering van koderingssekwenses |
Uitlijning van CDS-rye CDS-kodonoptimalisering |
1 |
Ontwerp en optimalisering van nie-koderende volgordes |
ontwerp en optimalisering van 5' UTR-ry ontwerp en optimalisering van 3' UTR-ry polyA-ry ontwerp en optimalisering |
1-2 |
5’ UTR\/3’ UTR |
|
3' PolyA stert |
|
mRNA Komponente | Biologiese Funksies | Optimeringsstrategieë |
5’ Kap | Beskerm mRNA teen degradasie deur exonukleasen en werk saam met die polyA-stert by die 3' einde, polyA-bindingeiwit en vertalinginisiëringfaktoreiwit om eiwitvertaling te begin. | Die natuurlike Cap1-struktuur vermy patroonherkeningsreseptore en verminder sodoende die natuurlike immuunreaksie, wat bereik kan word deur eenstappe gelyktydig-transkripsiekapping of tweestappe enzymatiese kapping [sien mRNA enzymatiese kapping en gelyktydig-transkripsiekapping vir meer inligting]. |
5’ UTR | Die 5' UTR kan deur ribosoom herken word, die vertaling van mRNA reguleer en die stabiliteit van mRNA beïnvloed. | Bevat Kozak-reekse sonder 'n baie stabiele sekondêre struktuur. Natuurlike UTR's van hoog uitgedrukke gene word voorgestel vir in vitro transkripsie (IVT) mRNA soos α-globine en β-globine. |
CDS | Eiwit-koderende gebiede en koderende reekse vir antigene, antilichame of ander funksionele eiwite. | Codonoptimering verhoog die vlak van vertaling, met die opmerking dat sekere nie-optimale codone 'n rol kan speel in proteïenvouing. |
3' UTR | Reguleer mRNA-vertaling en -stabiliteit. | Natuurlike UTR's van hoë uitdrukkingsgene word voorgekeur vir IVT-mRNA soos α-globine en β-globine. |
3' polyA staart | Reguleer proteïenuitdrukking en beskerm kapstruktuur teen afbreek. | Voldoende lengte (100-150 bp) is vereis; die kodering van 'n polyA-staart op die transkripsieplasmied-sjabloon verseker 'n meer gedefinieerde polyA-staartlengte. |
Meerplekke bronne van hoë uitdrukkingsnatuurlike & gemodifiseerde UTR-biblioteke; volwasse UTR-modifikasie-strategie;
Saamwerk met 'n professionele AI-algoritme span om die optimering van kodone te voltooi.
Voeg polyA-reekse toe volgens DNA-sjablone om die lengte van mRNA meer presies te beheer.
Verwezenlik effektiewe uitdrukking van mRNA met lae immunogenisiteit.
Sequentiedontwerp van 'n Dubbel-rapporteur mRNA: mCherry-eGFP mRNA
Yaohai Bio-Pharma se mRNA-dienste word voortgesit met die ontwerp en optimering van 'n dubbele rapporteurgen tandemreeks, wat gelyktydige uitdrukking van twee gene vermoontlik maak.
Deur 'n konvensionele transfeksieagente te gebruik, word die dubbele gen tandemreeks mCherry-eGFP mRNA in 293T-selle getransfekteer, en twee fluoreserende signale van mCherry (rooi) en versterkte groen fluoreserende eiwit (eGFP) word ná 48 ure met gelyktydige uitdrukking opgespoor, en die gestapelde grafiek word in geel beklemtoon.
Uitdrukking van mCherry-eGFP mRNA in 293T-sel