In vergelyking met die twee-stappe enzymatiese kapproses kan die een-stap gelyktydig transkripsiekapproses die prosesstroom beduidend verminder. Die metode is resultaatgerig en behels die byvoeging van kapanalogaats tot die in vitro transkripsie (IVT)-reaksie. Kapanalogaats kan by die begin van transkripsie ingelei word, en mRNA met 'n kapstruktuur kan verkry word wanneer transkripsie voltooi is. Huidige derde-generasie kapanalogaats kan ongekappeerde kaps vermy en direk die Cap 1-struktuur aan die transkripsieprodukt toevoeg.
Voor oorwegings van mRNA in vivo immunogenisiteit en vertalingsdoeltreffendheid word die IVT-proses dikwels gebruik met sekere tipes gemodifiseerde NTP's, en algemene gemodifiseerde nukleotiede is pseudouridine (Ψ), N1-methyl-pseudouridine (N1Ψ) en 5-methylcytosine (5mC).
Figuur: Diagram van mRNA Co-transkripsionele en Kapreaksie
Diensbesonderhede
Diens |
Diensbesonderhede |
Leveringstydperk (werkdaag) |
Co-transkripsionele kapping |
In vitro transkripsioneer antwoord (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Nukleotiedmodifikasies (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| DNA-sjabloon verwydering (DNase I) |
IVT-toestandsoptimering - opsioneel |
ReaksiekompONENTontwerp en optimering |
3-7 |
Ons kenmerke
- Verskeilde Nukleotiedmodifikasiestrateë
Meerder opsionele nukleotiedmodifikasiestrateë kan eiwituitdruk verbeter.
- Gesoogstelde Reaksiesisteem
Verkry 'n hoë transkripsieratio en hoë kappingsdoeltreffendheid.
Verkry 'n kappingskoers van meer as 95%.
Voorkom effektief mRNA-verval deur streng beheer van RNase in die eksperimentele omgewing en verbruiksgoeë.
Gevallestudie
Yaohai Bio-Pharma het 'n volwasse gelyktydige kappingsprosesplatform opgebou, wat skoon kapanaloga gebruik om direk die Cap1-struktuur toe te voeg terwyl terugwaartse kappings vermy word. Nadat standaard monsters voorbehandeling en kapillêre elektroforesis (CE)-deteksie uitgevoer is, kan die kappingskoers van versterkte groen fluoreserende eiwit (eGFP) mRNA meer as 95% bereik.
eGFP mRNA kappingsdoeltreffendheid van meer as 95%
Die eGFP mRNA en mCherry mRNA wat deur middel van gelyktydige transkripsionele kopving voorberei is, word onderskeidelik in 293T-selle getransfereer, en 'n sterk fluoreserende sein word na 48 ure waargeneem, wat daartoe lei dat die mRNA doeltreffend in 293T-selle uitgedruk word.
Uitdrukking van eGFP mRNA en mCherry mRNA in 293T-selle
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
