In vergelyking met die twee-stap ensiematiese kapping, kan die een-stap ko-transkripsionele kapping metode die prosesvloei aansienlik verminder. Die metode is resultaat-georiënteerd en behels die byvoeging van kap analoë tot die in vitro transkripsie (IVT) reaksie. Cap-analoë kan aan die begin van transkripsie bekendgestel word, en mRNA met cap-struktuur kan verkry word na voltooiing van transkripsie. Huidige derdegenerasie-dop-analoë kan omgekeerde bedekking vermy en direk Cap 1-struktuur by die transkripsieproduk voeg.
Vir oorwegings van mRNA in vivo immunogenisiteit en translasiedoeltreffendheid, neem die IVT-proses dikwels sekere soorte gemodifiseerde NTP's aan, en algemene gemodifiseerde nukleotiede is pseudouridien (Ψ), N1-metiel-pseudouri-dine (N1Ψ), en 5-metielsitosien (5mC) .
Figuur: Diagram van mRNA-ko-transkripsie- en afdekkingsreaksie
Diensbesonderhede
Diens |
Diensbesonderhede |
Afleweringstydperk (werksdag) |
Ko-transkripsiebedekking |
In vitro transkripsierespons (Clean Cap analoog) |
1-2 |
| Nukleotiedmodifikasies (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| DNA-sjabloonverwydering (DNase I) |
IVT toestand optimalisering - opsioneel |
Reaksie komponent ontwerp en optimalisering |
3-7 |
Ons funksies
- Gediversifiseerde Nukleotied Modifikasie Strategieë
Veelvuldige opsionele nukleotiedmodifikasiestrategieë kan proteïenuitdrukking verbeter.
- Geoptimaliseerde reaksiestelsel
Bereik 'n hoë transkripsieverhouding en hoë kapdoeltreffendheid.
Bereik 'n beperkingskoers van meer as 95%.
Voorkom mRNA-afbraak effektief deur streng beheer van RNase in die eksperimentele omgewing en verbruiksgoedere.
Gevallestudie
Yaohai Bio-Pharma het 'n volwasse mede-transkripsie-bedekkingsprosesplatform gebou, wat skoonkap-analoë gebruik om Cap1-struktuur direk by te voeg, terwyl omgekeerde bedekking vermy word. Na gestandaardiseerde monstervoorbehandeling en kapillêre elektroforese (CE)-opsporing, kan die beperkingstempo van verbeterde groen fluoresserende proteïen (eGFP) mRNA meer as 95% bereik.
eGFP mRNA-beperkingsdoeltreffendheid van meer as 95%
Die eGFP-mRNA en mCherry-mRNA wat deur ko-transkripsie-afdekking voorberei is, word onderskeidelik in 293T-selle getransfekteer, en 'n sterk fluoresserende sein word na 48h waargeneem, wat daarop dui dat die mRNA doeltreffend in 293T-selle uitgedruk word.
Uitdrukking van eGFP mRNA en mCherry mRNA in 293T Sel
AF
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
GEEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
MS
BE
MK
UR
BN
