Ten opsigte van die massaproduksie van mRNA is in vitro transkripsie (IVT) 'n effektiewer en volwassener metode. Die IVT-reaksie gebruik lineêre plasmid-DNA wat die T7-promotor bevat as sjabloon, en mRNA word gesintetiseer met nukleosietrifosfaat (NTP's) as substraat in die teenwoordigheid van T7 RNA-polimerase.
Nukleotiedmodifikasie is 'n deurbraak in die verkenning van mRNA, waar ongemodifiseerde mRNA-molekulêre deur intrasellulêre RNA-sensore herken word om inherente immuniteit te aktiveer. Vir oorwegings oor mRNA se in vivo immunogenisiteit en vertalingsdoeltreffendheid word die IVT-proses gewoonlik gebruik met sekere soorte gemodifiseerde NTP's, en algemene gemodifiseerde nukleotide is pseudouridine (Ψ), N1-metil-pseudouridine (N1Ψ) en 5-metilcitosien (5mC).
In vitro transkripsieproses van mRNA
In vitro transkripsie (IVT)-reaksiediagram
Dienste Details
Opsionele Diens |
Diensbesonderhede |
Leveringstydperk (werkdaag) |
Transkripsie in vitro (IVT) |
IVT, In vitro transkripsie |
1 |
| Nukleotiedmodifikasies (Ψ/N1Ψ/5mC, ens.) |
| DNA-sjabloon verwydering (DNase I) |
IVT-toestandsoptimering - opsioneel |
Ontwerp en optimering van IVT-reaksiekomponente |
2-5 |
Ons kenmerke
- Verskeilde Nukleotiedmodifikasiestrateë
Verbeter mRNA-stabiliteit en eiwituitdrukking in vivo.
- Streng toetsontwerp en optimering
mRNA-fragmentvoorbereiding tot 10kb kan bereik word.
- Doeltreffende Transkripsie
Deur IVT-reaksiestoestande te optimeer, is die transkripsiespoed op tot 1:200.
Streng beheer van RNase deur 'n eksperimentele omgewing en verbruiksgoevers kan effektief mRNA-verval voorkom.
Gevallestudie
Die huidige IVT-reaktiesisteem is ongeveer geoptimeer vir sintetiese sisteme met 'n lengte van ongeveer 100 nt, nie vir mRNAs van willekeurige lengte nie. Hoe langer die mRNA-sekwens is, hoe moeiliker is dit om te transkribeer en hoe meer geneig is dit tot degradasie.
Om op maat gemaakte mRNA-sequense van ongeveer 10 kb voor te berei, het Yaohai Bio-Pharma suksesvol hoë-kwaliteits monsters met 'n hoë transkripsieverhouding van 1:135 voorberei en 135 μg aan aanvanklik gezuiverde mRNA-produkte verkry nadat 1 μg van lineêre plasmid in vitro deur streng eksperimentele ontwerp, voortdurende optimering van reaksievoorwaardes en streng beheer van RNase getranskribeer is.
mRNA Identifiseer (Agarose Gel Elektroforesis)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
