Ten opsigte van die batchvoorbereiding van RNA-prekursore word 'n algemeen gebruikte metode in vitro transkripsie (IVT). Die IVT-reaksie gebruik lineariseerde plasmid DNA wat die T7-promotor bevat as 'n sjabloon en sintetiseer 'n RNA-prekursor met nukleosietrifosfaat (NTP's) as substraat in die teenwoordigheid van T7 RNA-polimerase.
In vitro sikliseringsmetodes sluit chemiese ligasie, enzymatiese ligasie en die permuteerde intron-exon (PIE) metode in. Chemiese ligasie en enzymatiese ligasie is geskik vir die siklisering van korter RNA's. Wanneer die fragment groter as 100 nt is, sal die sikliseringskoers drasties verminder. Teenoorgestel, kan die nuklease-metode wat op die PIE-stelsel gebaseer is, siklisering van 8 kb sekwensies bereik.
Onder die katalise van guanosinetrifosfaat (GTP), ondergaan die PIE-struktuur siklisering van ekstra-intronsekwensies. Gekombineer met 'n redelike strategie om die sikliseringskoers te verhoog, kan Yaohai Bio-Pharma siklisering van tot 4 kb sekwensies bereik, met 'n sikliseringsdoeltreffendheid van meer as 80%.
Die in vitro sikliseringsreaksie van RNA vloei soos volg af:
Die RNA-vorspeler word deur in vitro transkripsie gesintetiseer, en die PIE-komponent voltooi self-splicing onder die katalise van GTP om circRNA te vorm.
Dienste Details
| Proses |
Diensbesonderhede |
Leveringstydperk (werkdaag) |
| In vitro-transkripsie en sirkulasie |
Reaksiesisteembevestiging |
1-2 |
| In Vitro Transkripsie en Sikliseringsreaksies |
| RNase R-vertering |
| Reaksieoptimering |
Reaksie samestelling, tyd optimalisering |
2-5 |
Ons kenmerke
- Streng toetsontwerp en optimering
Siklisering van tot 4 kb RNA kan bereik word.
- Hoë sikliseringeffektiwiteit
'n Sikliseringstempo van meer as 80% kan deur 'n rasionele volgorde-optimeringsstrategie bereik word.
Deur streng beheer van RNasese in die eksperimentele omgewing en verbruikersartikels, word RNA-verval effektief voorkom.
Gevallestudie
In vitro sikliserings- en verrijking van circRNA
Gebaseer op die PIE-stelsel, het Yaohai Bio-Pharma die volgorde van circRNA geoptimaliseer, met 'n sikliseringspersentasie van meer as 80% deur middel van agarose gel-elektrofose (AGE). Deur RNase R te gebruik om circRNA te verrijk, wys E-gel elektrofose resultate dat die lineêre RNA-voorloper verteer word, en na verdere purifikasie kan die meeste van die gesnyde circRNA verwyder word. Die purifikasie-oplossing is selfontwikkel deur Yaohai Bio-Pharma.
In vitro sirkulasie en verrijking van circRNA
AF
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
MS
BE
MK
UR
BN
