In Vitro sinteza mRNA
Glavni sastojci mRNA su 5’-kap, 5’-UTR, otvoreni čitački okvir (ORF), 5’-UTR i 5’ poli A rep, koji su neophodni za održavanje funkcije mRNA. Istraživači su koristili različite metode da identifikuju i optimiziraju sekvence i strukture mRNA.
Sinteza mRNA vrši se na osnovu in vitro transkripcije (IVT) pomoću linearnih DNA šablonova, RNA polimeraza (T3, T7 ili SP6), neizmenjenih ili izmenjenih nukleotida, enzima i odgovarajućih reaktanata.
Modifikacija 5’ Kap
Sekvenca zrelog mRNA iz eukariotske stanice prikazuje 7-metilguanozin (m7G) kap na 5' kraju, što poboljšava stabilnost mRNA i efikasnost prevoda. Postoje dva opšta načina za izdvajanje mRNA in vitro. Prvo, mRNA može biti zakapirovana zajedno sa tranzkriptom in vitro dodavanjem kapijalnog analogna m7GpppG strukture (npr., CleanCap) u IVT sistem. Ovaj metod ko-transkripcijskog zakapirovanja obezbeđuje prirodnu 5' kapsulnu strukturu i povećava efikasnost zakapirovanja skoro do 90-99%. Drugo, mapiranje mRNA-ja se takođe može izvesti koristeći enzimsku reakciju nakon tranzkripcije in vitro.
Polija Modifikacija
Poly(A) repče takođe produžava polučas života mRNA u vivo i poboljšava efikasnost prevodjenja mRNA. Dužina amplifikovanog poly(A) repča bi trebala biti 100-300 nukleotida. Dodatno, modifikovano adenozin povećava stabilnost poly A repča protiv degradacije od strane celijaskih RNaz. Poly A repče može biti umetnut kroz in vitro transkripciju koristeći DNA šablon koji kodira poly A, čime se dobija određena dužina poly A niza. Recombinantna poly A polimeraza takođe može biti korišćena za enzimsku poliadenilaciju nakon transkripcije mRNA.
Modifikacija nukleotida
Modificirani nukleozidi mogu inhibirati prepoznavanje i/ili aktivaciju receptora za prepoznavanje uzoraka (PRR) i poboljšati efikasnost mRNA vakcina na dva potpuno različita načina. Dodavanje određenih hemijski modificiranih nukleozida, uključujući pseudouridin (ψ), 1-metilpseudouridin (m1ψ), tiouridin (s4U) i 5-metilcitozin (m5C), može sprečiti aktivaciju TLR7/8 i drugih imunoloških receptora, što značajno smanjuje imunogenost mRNA.
Sistem dostave mRNA
Da bi se održao funkcionalni mRNA, on mora da unutar hostovog citozola izrazi specifične antigene. Jedan od najtežih izazova pred vakcinama i terapijama baziranim na mRNA je dostava mRNA u ciljane stanice sa dovoljno visokim nivoima prevoda, što zahteva vrlo specifične i efikasne sisteme za dostavu mRNA. Razvijeno je nekoliko vektora za dostavu mRNA, uključujući dendritične ćelije (DCs), protamin, kationski polimeri i kationski lipozomi.
Kompleksi kationih lipida sa mRNA i drugim pripremama mogu zajedno formirati nanocstice veličine 80-200 nm, poznate kao lipidne nanocstice (LNP). Kao jedan od najnaprednijih sistema za dostavljanje mRNA, LNP uključuje ionizabilne katione lipide, prirodne fosfolipide, holesterol i polietilen glikol (PEG). Nekoliko RNA vakcina i terapija (siRNA i mRNA) odobrenih od strane U.S. Food and Drug Administration temelji se na sistemima dostave LNP.
Yaohai Bio-Pharma Pruža Kompletno Rešenje za RNA
|
Katalog RNA proizvoda
- Katalog mRNA proizvoda
- Katalog saRNA proizvoda
- Katalog circRNA proizvoda
|
Prilagođena sinteza RNA
- Prilagođena sinteza mRNA
- Prilagođena sinteza saRNA
- Prilagođena sinteza circRNA
|
mRNA CDMO usluge
- Razvoj procesa
- GMP Proizvodnja
- Sterilno ispunjavanje i završna obrada
- Аналитика и тестирање
|
Prilagođeni Izvodi
|
Klasa
|
Isporučivi
|
Specifikacija
|
Primene
|
|
ne-GMP
|
Lekovita tvar, mRNA
|
0.1~10 mg (mRNA)
|
Preklinička istraživanja kao što su transfekcija stanica, Razvoj analitičkih metoda, Prelazne studije stabilnosti, Razvoj formulacije
|
|
Lekoviti proizvod, LNP-mRNA
|
|
GMP, Sterilnost
|
Lekovita tvar, mRNA
|
10 mg~70 g
|
Investigational new drug (IND), Clinical trial authorisation (CTA), Opšte snabdevanje kliničkim probama, Biologic license application (BLA), Komercijalno snabdevanje
|
|
Lekoviti proizvod, LNP-mRNA
|
5000 flašica ili prenapunjene šprice/kartuše
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
