Integrita mRNA
Význam analýzy integrity mRNA
mRNA sú uznávané pre svoju inherentnú nestabilitu a sú náchylné na fragmentáciu v prítomnosti vonkajších faktorov, najmä počas in vitro transkripcie (IVT) a purifikačných procesov, kde všadeprítomné nukleázy predstavujú výzvu. Hodnotenie integrity mRNA je rozhodujúce pri následnom vývoji liekov na báze mRNA, čím sa zabezpečí bezpečnosť aj dostupnosť produktu.
Yaohai-BioPharma poskytuje komplexné služby testovania integrity mRNA využívajúce metódy, ako je elektroforéza na agarózovom géli (AGE), kapilárna elektroforéza (CEG) a vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC), pričom sa dodržiavajú prísne štandardy kvality pre výskum aj klinické skúšky.
Regulačné požiadavky na integritu mRNA
Podľa regulačných úvah WHO sa „integrita štruktúry mRNA považuje za kritický atribút kvality pre uvoľňovanie mRNA. Preto je potrebná kontrola integrity mRNA, percento intaktnej mRNA, percento fragmentov mRNA atď.
Analytická metóda
Analýza |
Metódy |
integrita mRNA |
AGE, Agarózagel elektroforéza |
CGE,Kapilárna elektroforéza |
CGE-LIF, kapilárna gélová elektroforéza so svetlom indukovanou fluorescenčnou detekciou |
Integrita mRNA elektroforézou na agarózovom géli
Elektroforéza na agarózovom géli je široko používaná technika na hodnotenie integrity celkovej RNA. To zahŕňa nanesenie vzorky RNA na denaturačnom agarózovom géli zafarbenom buď etídium bromidom alebo SYBR Green. Denaturačný gél zložený z agarózy uľahčuje separáciu RNA na základe veľkosti pri aplikácii elektrického prúdu. Keď negatívne nabitá RNA migruje smerom k pozitívnemu koncu gélu, menšie fragmenty sa pohybujú rýchlejšie, čo vedie k triedeniu molekúl RNA na základe veľkosti.
Integrita mRNA kapilárnou gélovou elektroforézou
Kapilárna gélová elektroforéza (CGE) predstavuje analytický prístup s vysokým rozlíšením, ktorý je kľúčový pre meranie integrity molekúl RNA podľa dĺžky. Toto hodnotenie má význam pre zabezpečenie kvality, pochopenie účinnosti a optimalizáciu výrobných procesov. Podobne ako elektroforéza na agarózovom géli, CGE využíva elektrický prúd na segregáciu fragmentov RNA na základe ich náboja a veľkosti. Pri CGE je kapilára naplnená separačnou gélovou matricou naplnenou fluorescenčným farbivom. Pohyb RNA pozdĺž kapiláry závisí od jej veľkosti a detekcia sa dosahuje pomocou ultrafialových (UV) alebo svetlom indukovaných fluorescenčných detektorov (LIF).
EN
