Zloženie lipidov LNP a ich množstvo
Význam analýzy zloženia lipidov LNP
Lipidové nanočastice (LNP), obsahujúce katiónový lipid, cholesterol, fosfolipid a PEG-konjugovaný lipid, slúžia ako prominentné dodávacie systémy pre mRNA liekové produkty. Stabilita a dvojvrstvová tekutosť LNP závisí od vlastností a obsahu rôznych lipidov použitých v systéme formulácií. Zloženie lipidov je veľmi dôležité pre to, ako dobre LNP dodávajú lieky.
Yaohai-BioPharma poskytuje riešenia na identifikáciu a kvantifikáciu lipidového zloženia mRNA-LNP pomocou metódy vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie s detekciou nabitého aerosólu (HPLC-CAD).
Regulačné požiadavky na zloženie lipidov
Podľa regulačných hľadísk WHO by sa malo opísať konečné zloženie vakcíny vrátane lipidov spolu s množstvom zložiek v každej prezentácii.
Analytická metóda
Analýza |
Metódy |
Lipidové zloženie |
HPLC v kombinácii s Corona Charged Aerosol Detector (CAD) |
Postup
Krok 1. Príprava vzorky lipidov
Výber riedidla má prvoradý význam pre analýzu lipidových zložiek v mRNA-LNP liekových produktoch. Riedidlo by malo účinne rozpustiť každú lipidovú zložku a narušiť akékoľvek interakcie medzi lipidmi a zapuzdrenou mRNA. Potenciálne riedidlá zahŕňajú etanol, etanol/dimetylsulfoxid (DMSO), etanol/formamid, etanol/trietylamínacetát a ďalšie.
Krok 2. HPLC-CAD
Kvapalinová chromatografia na reverznej fáze (RP-HPLC) spárovaná s detektorom nabitého aerosólu (CAD) bola začlenená do testovania lipidového zloženia LNP. Vzhľadom na to, že lipidom chýbajú chromofóry a neabsorbujú ultrafialové (UV) žiarenie bez derivatizácie, volatilizácia je zvyčajne náročná. CAD, ktorý je citlivejší, dokáže rozpoznať širšie spektrum obsahu lipidov. Predtým bola formulovaná ultravysoko výkonná kvapalinová chromatografia (UHPLC) spojená s metódou nabitého aerosólového detektora (CAD) a aplikovaná v lipidovej analýze pre malé interferujúce RNA (siRNA) LNP štúdie.
Krok 3. Analýza údajov
Množstvo každého lipidu vo vzorke zahŕňalo výpočty odvodené zo štandardnej krivky vynásobenej riediacim faktorom. Tento proces poskytol obsah lipidov pre každú zložku vo vzorke mRNA-LNP.
Prípad analýzy zloženia lipidov LNP s HPLC-CAD
Na základe HPLC-CAD spoločnosť Yaohai-BioPharma vyvinula robustnú metódu na analýzu lipidových zložiek mRNA-LNP. Táto metóda bola overená ako lineárna, opakovateľná, presná, presná a špecifická pre formulácie LNP, čo by mohlo podporiť vývoj procesu, vývoj formulácií, testovanie stability a uvoľňovanie mRNA-LNP.
Chromatografický profil 4 lipidov metódou Yaohai-BioPharma HPLC-CAD
Linearita metódy Yaohai-BioPharma HPLC-CAD (R2＞0.99)
EN
