Integritatea ARNm
Semnificația analizei integrității ARNm
ARNm-urile sunt recunoscute pentru instabilitatea lor inerentă și sunt susceptibile la fragmentare în prezența factorilor externi, în special în timpul proceselor de transcripție in vitro (IVT) și purificare, în care nucleazele omniprezente reprezintă o provocare. Evaluarea integrității ARNm este crucială în dezvoltarea ulterioară a medicamentelor pe bază de ARNm, asigurând atât siguranța, cât și disponibilitatea produsului.
Yaohai-BioPharma oferă servicii complete de testare a integrității ARNm, utilizând metode precum electroforeza pe gel de agaroză (AGE), electroforeza capilară (CEG) și cromatografia lichidă de înaltă performanță (HPLC), respectând standarde riguroase de calitate atât pentru cercetare, cât și pentru studiile clinice.
Cerințe de reglementare pentru integritatea ARNm
Conform considerațiilor de reglementare ale OMS, „integritatea structurii ARNm este considerată a fi un atribut de calitate critic pentru eliberarea ARNm. Astfel, este necesar controlul pentru integritatea ARNm, procentul de ARNm intact, procentul de fragmente de ARNm și așa mai departe.”
Metoda analitică
Analiză |
Aplicate |
integritatea ARNm |
AGE, Agarosegel electroforeza |
CGE,Electroforeza capilară |
CGE-LIF, Electroforeză pe gel capilar cu detectarea fluorescenței induse de lumină |
Integritatea ARNm prin electroforeză pe gel de agaroză
Electroforeza pe gel de agaroză este o tehnică utilizată pe scară largă pentru evaluarea integrității ARN total. Aceasta implică rularea probei de ARN pe un gel de agaroză denaturant, colorat fie cu bromură de etidio, fie cu verde SYBR. Gelul denaturant, compus din agaroză, facilitează separarea ARN-ului în funcție de mărime atunci când se aplică un curent electric. Pe măsură ce ARN-ul încărcat negativ migrează către capătul pozitiv al gelului, fragmentele mai mici se mișcă mai rapid, rezultând o sortare bazată pe dimensiune a moleculelor de ARN.
Integritatea ARNm prin electroforeză pe gel capilar
Electroforeza pe gel capilar (CGE) reprezintă o abordare analitică de înaltă rezoluție esențială pentru măsurarea integrității moleculelor de ARN după lungime. Această evaluare are importanță pentru asigurarea calității, înțelegerea potenței și optimizarea proceselor de producție. Similar cu electroforeza pe gel de agaroză, CGE utilizează un curent electric pentru a segrega fragmentele de ARN în funcție de sarcina și dimensiunea lor. În CGE, un capilar este umplut cu o matrice de gel de separare infuzată cu un colorant fluorescent. Mișcarea ARN-ului de-a lungul capilarului este condiționată de dimensiunea acestuia, iar detectarea este realizată folosind detectoare cu ultraviolete (UV) sau fluorescență indusă de lumină (LIF).
EN
