Teste de potență pe bază de celule
Semnificația testului de potență ARNm
Odată cu dezvoltarea rapidă a vaccinurilor și a medicamentelor ARNm, este necesar un grup specific de metode de analiză pentru a testa potența (definirea activității lor biologice), implicând eficiența translațională a ARNm. Aceste metode se bazează în mod obișnuit pe transfecția celulară și pe teste funcționale ale proteinei țintă.
Yaohai Bio-Pharma oferă teste de potență pe bază de celule pentru substanțe medicamentoase ARNm sau produse LNP, inclusiv transfecția celulară (celule 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 etc.) și teste ELISA sau Western Blotting (WB).
Cerințe de reglementare pentru testele de potență
Conform considerațiilor de reglementare ale OMS, „Eficiența fiecărui lot al vaccinului final ar trebui determinată folosind o metodă (metode) funcționale cantitative și validate adecvate. Potențialele teste de potență in vitro pot include sisteme de transfecție pe bază de celule sau teste fără celule.” Și USP a recomandat un „test pe bază de celule” pentru a testa potența ARNm, adică expresia proteinei țintă.
Metoda analitică
|
Analiză
|
Aplicate
|
|
Teste de potență
|
Transfecția pe bază de celule și proteina țintă identifică:
celule 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 etc.
|
Procedură
Pasul 1. Transfecția pe bază de celule cu ARNm sau ARNm-LNP
Celulele sunt cultivate și transfectate cu ARNm sau ARNm-LNP. În detaliu, ARNm este transfectat după ce a fost amestecat cu un reactiv de transfecție, în timp ce ARNm-LNP este transfectat direct în celule. După 24-48 de ore, se clarifică supernatantul care conține proteina exprimată prin centrifugare.
Pasul 2. Teste funcționale ale proteinei țintă
Efectuați teste ELISA sau WB pentru a evalua legarea funcțională a proteinelor țintă.
Studiu de caz
Testele de potență pe bază de celule ale probelor de ARNm
Yaohai-BioPharma a dezvoltat o metodă de testare a potenței pe bază de celule pentru ARNm, care implică culturi celulare, transfecție celulară și teste funcționale de proteine. Am transfectat ARNm eGFP, ARNm mCherry, ARNm luciferază, ARNm proteină spike în celule 293T și am detectat proteina țintă prin fluorescență, semnal luminiscent sau colorat, WB, ELISA.
Testele de potență pe bază de celule ale produselor ARNm de către Yaohai Bio-Pharma
RO
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NU
PL
PT
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
