Prepararea CircARN necesită ARN liniar ca material precursor (precursor de ARN) pentru ciclizare, unde precursorul de ARN este de obicei preparat utilizând ADN plasmid liniarizat ca matriță de transcripție și transcris in vitro cu ajutorul ARN polimerazei T7.
ADN-ul plasmidic de înaltă calitate este esențial pentru transcripția in vitro (IVT). Bazat pe platforma de servicii de pregătire a plasmidelor mature, Yaohai Bio-Pharma poate oferi un serviciu de preparare a ADN-ului plasmid liniarizat (pDNA) de înaltă puritate și standard pentru a asigura integritatea produselor IVT.
Detalii despre servicii
| Proces | Service optional | Detalii despre servicii | Perioada de livrare (zi lucrătoare) |
| Prepararea plasmidelor circulare | Sinteza genelor | Sinteza genică (terță parte) | 7-10 |
| Amplificarea plasmidei | Amplificarea plasmidei | 2 |
| Extracția plasmidelor |
| Prepararea plasmidei liniarizate | Linearizarea și purificarea plasmidelor | Linearizarea plasmidelor | 1 |
| Linearizare purificare ADN |
| Controlul calității ADN-ului plasmidic | Puritatea concentrației | Spectrofotometrie ultravioletă (UV). | 1-2 |
| Conformația plasmidică | Electroforeză pe gel de agaroză (AGE) |
| Electroforeză capilară (CE)-opțional |
| Identificarea plasmidei | Identificarea enzimei de restricție/ AGE |
Caracteristicile noastre
- Plasmid șablon de tăiere liberă
Selectarea flexibilă a metodelor de liniarizare
- Rată ridicată de recuperare
Optimizarea metodelor de extracție și purificare a ADN-ului pentru a obține rate ridicate de recuperare.
- Control strict al calității
Standarde stricte de control al procesului, cu o rată de conformare superhelicală a probelor de plasmide pentru cercetare de peste 80%.
- Procesul platformei mature
Servicii de pregătire și control al calității plasmide la standarde înalte și de înaltă eficiență pentru a satisface nevoile experimentale.
Studiu de caz
Luând ca exemplu produsul Yaohai Bio-Pharma mCherry circRNA, raportul supercoiled al probelor de plasmid șablon de transcripție (grad de cercetare) este mai mult de 70%, cu o rată de liniarizare de aproape 100%.
mCherry circARN este preparat cu plasmidă liniarizată ca matriță și transfectat în celule 293T. Nivelul ridicat de exprimare a fluorescenței (fluorescență roșie) este detectat după 24 de ore de transfecție, care va fi îmbunătățit după 48 de ore și poate fi încă detectat în a 7-a zi și a 14-a zi după transfecție.
Proteina mCherry este exprimată stabil și eficient, iar puritatea șablonului transcripțional poate îndeplini cerințele de produs medicament circRNA (DP) cu o calitate înaltă.
Validarea expresiei in vitro a mCherry circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NU
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
