Compoziția lipidelor LNP Identificați și cantitatea
Semnificația analizei compoziției lipidelor LNP
Nanoparticulele lipidice (LNP), cuprinzând lipide cationice, colesterol, fosfolipide și lipide conjugate cu PEG, servesc ca sisteme de livrare proeminente pentru produsele medicamentoase ARNm. Stabilitatea și fluiditatea în două straturi ale LNP-urilor depind de proprietățile și conținutul diferitelor lipide utilizate în sistemul de formulare. Compoziția lipidelor este foarte importantă pentru cât de bine eliberează medicamentele LNP-urile.
Yaohai-BioPharma oferă soluții pentru identificarea și cuantificarea compoziției lipidelor ARNm-LNP utilizând metoda cromatografiei lichide de înaltă performanță cu detectarea aerosolilor încărcați (HPLC-CAD).
Cerințe de reglementare pentru compoziția lipidelor
Conform considerațiilor de reglementare ale OMS, „Compoziția finală a vaccinului, inclusiv lipidele, ar trebui descrisă împreună cu cantitatea componentelor din fiecare prezentare”.
Metoda analitică
Analiză |
Metode |
Compoziția lipidică |
HPLC combinat cu detector de aerosoli cu încărcare corona (CAD) |
Procedură
Pasul 1. Prepararea probei de lipide
Alegerea diluantului este de o importanță capitală pentru analiza componentelor lipidice din produsele medicamentoase ARNm-LNP. Diluantul ar trebui să dizolve eficient fiecare componentă lipidă și să perturbe orice interacțiune dintre lipide și ARNm încapsulat. Diluanții potențiali includ etanol, etanol/dimetil sulfoxid (DMSO), etanol/formamidă, etanol/acetat de trietilamină și alții.
Pasul 2. HPLC-CAD
Cromatografia lichidă în fază inversă (RP-HPLC) asociată cu un detector de aerosoli încărcat (CAD) a fost încorporată în testarea compoziției lipidelor LNP. Având în vedere că lipidele nu au cromofori și nu absorb radiația ultravioletă (UV) fără derivatizare, volatilizarea este de obicei o provocare. CAD, fiind mai sensibil, poate discerne un spectru mai larg de conținut de lipide. Anterior, o cromatografie lichidă de ultraînaltă performanță (UHPLC) cuplată cu o metodă cu detector de aerosoli încărcat (CAD) a fost formulată și aplicată în analiza lipidelor pentru studiile LNP cu ARN interferent mic (siRNA).
Pasul 3. Analiza datelor
Cantitatea fiecărei lipide din eșantion a implicat calcule derivate din curba standard înmulțită cu factorul de diluție. Acest proces a dat conținutul de lipide pentru fiecare constituent din proba de ARNm-LNP.
Cazul analizei compoziției lipidelor LNP cu HPLC-CAD
Pe baza HPLC-CAD, Yaohai-BioPharma a dezvoltat o metodă robustă pentru analiza componentelor lipidice ale ARNm-LNP. Această metodă a fost validată ca fiind liniară, repetabilă, precisă, exactă și specifică pentru formulările LNP, care ar putea sprijini dezvoltarea procesului, dezvoltarea formulării, testarea stabilității și eliberarea mRNA-LNP.
Profilul cromatografic a 4 lipide prin metoda HPLC-CAD Yaohai-BioPharma
Linearitatea metodei HPLC-CAD Yaohai-BioPharma (R2＞0.99)
EN
