Yaohai Bio-Pharma pregătește circARN pe baza sistemului PIE (alinierea exonilor și intronilor), care se bazează pe funcția de auto-splicing a intronilor de tip I pentru a obține ciclizarea ARN. Structura PIE este proiectată folosind gena T4 td sau gena precursor a ARNt de pește, iar aranjamentul este după cum urmează:
Intronul ARN și fragmentul de exon suport sunt împărțite în două părți (terminal 5’ și terminalul 3’), unde secvența terminală 5’ este transferată la coada secvenței țintă, secvența terminală 3’ este inserată în partea din față a secvenței țintă. secvența țintă, iar secvența genei țintă este inserată în mijloc.
Sub cataliza GTP, structura PIE duce la ciclizarea altor secvențe decât intronii. Combinat cu o strategie rezonabilă de îmbunătățire a ratei de ciclizare, Yaohai Bio-Pharma poate realiza ciclizarea secvențelor de până la 4 kb cu o rată de ciclizare de peste 80%.
Figura 1. Circulația in vitro a circARN pe baza sistemului PIE
Detalii despre servicii
| Proces |
Service optional |
Detalii despre servicii |
Perioada de livrare (zi lucratoare) |
| proiectarea și optimizarea secvenței circARN |
Proiectarea si optimizarea secventelor de codare |
Alinierea secvenței CDS
Optimizarea codonului CDS
|
1 |
| Proiectarea si optimizarea secventelor necodante |
Proiectarea și optimizarea secvenței de intron și exon
Proiectare și optimizare a secvenței brațelor omoloage
Proiectarea și optimizarea secvenței distanțierelor
|
1-2 |
Strategii comune pentru proiectarea secvenței ARNm
| Componente CircARN |
Funcții biologice |
Strategii de optimizare |
| Secvențe de intron și exon cu două terminale |
Auto-splicing intron catalizat de GTP pentru ciclizarea secvențelor în afara intronului. |
Proiectat conform genei T4 td sau genei precursoare a ARNt a uleiului de pește. |
| Codificare |
IRES |
Locul intern de recunoaștere a ribozomilor care reglează translația circARN. |
Screening-ul secvențelor site-ului intern de intrare în ribozom (IRES) din diferite surse virale, de exemplu, EMCV, surse CVB3. |
| CDS |
Regiuni care codifică proteine, secvențe care codifică antigene, anticorpi sau alte proteine funcționale. |
Optimizarea codonilor crește nivelul de traducere; anumiți codoni non-optimi pot juca un rol în plierea proteinelor. |
| Necodificare |
Secvențe necodante |
Vizează miARN-urile sau proteinele pentru a exercita reglarea genelor sau proteinelor. |
Direcționarea site-urilor de legare specifice pentru miARN sau proteine poate repeta secvențele site-ului de legare. |
Caracteristicile noastre
- Sistem optimizat de ciclizare PIE Combinație cu strategii rezonabile de optimizare pentru a obține o rată de ciclizare de peste 80%;
- Echipa de ultimă oră de optimizare CDS Cooperare cu echipa profesionistă de algoritmi AI pentru a finaliza optimizarea codonilor regiunii CDS;
- Procesul circRNA matur și perfect poate fi obținut cu o eficiență ridicată de ciclizare, stabilitate ridicată și eficiență ridicată a translației.
Studiu de caz
Yaohai Bio-Pharma a lansat produsul de control circRNA a proteinei fluorescente verzi îmbunătățite (eGFP), care se bazează pe sistemul PIE pentru a obține ciclizarea ARN.
Folosind un reactiv de transfecție convențional, eGFP circRNA este transfectat în celule 293T, iar semnalul fluorescent eGFP (verde) poate fi detectat după 24 de ore, care va fi îmbunătățit după 48 de ore. Semnalul fluorescent poate fi încă detectat în a 7-a zi și a 14-a zi după. transfecție.
Validarea expresiei in vitro a circRNA eGFP
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NU
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
