ARNm circular (ARNm circular) a fost utilizat pe scară largă în studiul funcțiilor genelor sau proteinelor. Între timp, este popular în dezvoltarea de produse biologice profilactice și terapeutice, similar cu ARNm.
Yaohai Bio-Pharma a stabilit un set de tehnologii de sinteză circRNA pentru a oferi ARN de înaltă calitate, cum ar fi proiectarea și optimizarea secvenței, transcripția in vitro (IVT), circularizarea/ciclizarea, purificarea și încapsularea nanoparticulelor lipidice (LNP). Toate produsele sunt lansate conform standardelor stricte de control al calității (QC).
În comparație cu ARNm liniar, ARN-ul circular (circRNA) este mai stabil ca structură și este un punct fierbinte major în cercetarea actuală a medicamentelor cu acid nucleic. Are o gamă largă de aplicații în diferite domenii, fie ca circARN codant sau circARN necodând, inclusiv vaccinuri profilactice pentru boli infecțioase, vaccinuri oncologice terapeutice, medicamente oncologice terapeutice, terapie de înlocuire a proteinelor, medicină regenerativă, terapie celulară și genică (CGT) , rol de burețel molecular și aptamer ARN.
Proces | Service optional | Detalii despre servicii | Perioada de livrare (zi) |
Proiectarea și optimizarea secvenței circRNA | Proiectarea și optimizarea secvențelor de codare | Optimizarea codonului CDS | 1 |
Proiectarea și optimizarea secvențelor necodificate | Secvență de intron și exon, proiectare și optimizare a brațului și distanțierului omolog | 1-2 | |
Prepararea Plasmidei Circulare | Sinteza genelor | Sinteză genetică (terță parte) | 7-10 |
Amplificarea plasmidelor | Amplificarea plasmidelor | 2 | |
Extracția plasmidelor | |||
Prepararea Plasmidei Linearizate | Linearizarea și purificarea plasmidelor | Linearizarea plasmidei | 1 |
Linearizare Purificarea ADN | |||
Transcriere și ciclizare in vitro | Transcriere și ciclizare in vitro | Transcriere in vitro și reacții de ciclizare | 1-2 |
Digestia RNază R | |||
Optimizare-opțional | Compoziția reacției, optimizarea timpului | 2-5 | |
Purificarea circARN | Metoda convențională de purificare | Precipitații de clorură de litiu | 1 |
Purificarea mărgele magnetice | 1 | ||
Purificare circARN extrem de pură | Cromatografie lichidă preparativă de înaltă performanță (HPLC) | 1-2 | |
Schimb tampon | Ultrafiltrarea | 1 | |
liofilizarea circARN | Umplerea probei | Umplere | 2-3 |
Liofilizare | Pre-congelare | ||
Uscarea primară (sublimare) | |||
Uscarea secundară (desorbție) | |||
Încapsularea circRNA-LNP | Încapsularea LNP | Pretratare material și lichid | 2 |
Amestecare cu dispozitive microfluidice | |||
Schimb tampon | Filtrare cu flux tangenţial | 1 | |
sterilizat | Filtrare | ||
Controlul calității ADN-ului plasmidic | Concentrație/puritate | Spectrofotometrie cu ultraviolete (UV). | 1-2 |
Conformația plasmidică | Electroforeza pe gel de agaroză (AGE) | ||
Electroforeza capilară (CE)-Opțional | |||
Identificarea plasmidei | Identificarea enzimei de restricție/AGE | ||
Controlul calității circRNA | Concentrație/puritate | Spectrofotometrie cu ultraviolete (UV). | - |
Puritate | Electroforeză pe gel de agaroză (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC-opțional | 1 | ||
Controlul calității circRNA-LNP | Eficiența încapsulării | Metoda RiboGreen | 1 |
Dimensiunea particulelor | Difuzarea dinamică a luminii (DLS) | 1 | |
Indicele de polidispersitate | Difuzarea dinamică a luminii (DLS) | 1 | |
Potenţialul Zeta | Difuzarea dinamică a luminii (DLS) | 1 | |
Test de potență pe bază de celule | Transfecția celulară | Placare celulară, transfecție celulară | 4 |
Detectarea proteinelor țintă | Observarea fluorescenței, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Am transfectat proteina verde fluorescentă circRNA (eGFP circRNA), mCherry circRNA, luciferază circRNA în celule 293T și am detectat proteina țintă prin fluorescență, semnal luminescent sau color, Western blot (WB), test imunosorbent legat de enzime (ELISA).
Testele de potență pe bază de celule ale probelor de circARN de către Yaohai Bio-Pharma