Dzisiaj Yaohai z wielką ekscytacją dzieli się swoim protokołem transkrypcji in vitro dla długiego RNA. Jest to skuteczna strategia, którą naukowcy często stosują do produkcji RNA w laboratorium. W ten sposób naukowcy mogą produkować znacząco dużą liczbę długiego RNA — coś niezbędnego do badań w różnych dziedzinach biologicznych. Tutaj przedstawiamy przewodnik krok po kroku dotyczący przygotowywania długich RNA za pomocą transkrypcji in vitro. Porozmawiamy również o tym, jak możemy ulepszyć ten proces i spróbujemy rozwiązać niektóre problemy, z którymi borykasz się podczas syntezy długiego RNA.
Do transkrypcji in vitro wymagane są pewne niezbędne składniki, zwłaszcza długie RNA. Będziesz musiał dostarczyć enzym zwany polimerazą RNA, materiał do pisania w postaci trifosforanów nukleotydów (NTP), bufor wspomagający reakcję i pewien szablon DNA. Jak to zrobić krok po kroku, możesz znaleźć szczegółowy przewodnik tutaj:
Kilka czynników jest bardzo ważnych dla dobrego działania syntezy RNA. Przede wszystkim ilość jonów magnezu w samym buforze jest ważna. Polimeraza RNA wymaga znacznej ilości magnezu, aby wspierać prawidłową interakcję z matrycą DNA i późniejsze fałdowanie RNA. Drugim ważnym aspektem, który należy wziąć pod uwagę, jest stężenie matrycy DNA. Dokładniej rzecz biorąc, musisz mieć wystarczającą reakcję matrycy DNA, aby uzyskać dobre plony RNA.
Długie RNA, oczywiście, będzie miało swój własny zestaw problemów. Problemy te mogą być związane z rozpadem RNA, wpływać na sposób składania RNA i budować struktury, które potencjalnie zakłócają syntezę RNA. Jednym ze sposobów rozwiązania tych problemów jest dostosowanie buforu, który bierzesz. Aby uzyskać bardziej kompleksową strukturę RNA, naukowcy mogą dodać różne specjalne substancje chemiczne, takie jak DTT i p-merkaptoetanol, aby pomóc RNA złożyć się prawidłowo i zapobiec jego sklejaniu się lub zlepianiu.
Ponadto nie wszystkie typy długiego RNA są takie same i niektóre mogą wymagać alternatywnych metod syntezy. Istnieją specjalne cechy, które naukowcy mogą potrzebować dodać do RNA, takie jak dodanie czapeczki 5 lub ogona Poly-A. Jeśli jest to konieczne (jak wyjaśniono później), naukowcy powinni uwzględnić inne enzymy, takie jak guanylotransferaza i polimeraza poli(A). Należy również wybrać odpowiedni enzym polimerazy RNA, który naturalnie umożliwia produkcję większej ilości RNA. Gdy tylko długi RNA musi zostać zsyntetyzowany, będziemy musieli zidentyfikować najlepsze warunki.
Długie transkrypty RNA in vitroIstnieje szereg kluczowych zastosowań protokołu długiego transkryptu RNA in vitro w wielu badaniach, testach i przedsięwzięciach terapeutycznych. Pomaga naukowcom zrozumieć strukturę RNA, sposób jego działania i to, jak mogą modyfikować geny za pomocą współczesnych technologii. Bardziej współczesne odkrycia różnych chorób i ich terapii, takich jak bardzo aktualne terapie RNA, pozwalają nam uwierzyć, jak przydatna może być ta technologia odczytu dla medycyny.
Istnieje wiele zalet korzystania z tego protokołu. Metoda oparta na elektroforezie jest ogólnie najbardziej wydajnym i opłacalnym sposobem na produkcję dużych ilości długiego RNA. Oprócz jakości RNA, dobra wydajność jest również ważnym czynnikiem dla naukowców, który pomaga im w badaniach, zwłaszcza jeśli potrzebują dużych ilości RNA do eksperymentów ze względu na wysoki poziom materiału wejściowego na początek. Ponadto transkrypcja in vitro długiego RNA jest zazwyczaj dokładniejsza i bardziej powtarzalna niż synteza chemiczna lub komórkowa synteza RNA.
Yaohai BioPharma to jedna z 10 najlepszych mikrobiologicznych firm CDMO, która obejmuje protokół transkryptu in vitro dla długiego RNA, a także kwestie regulacyjne. Posiadamy system zarządzania jakością zgodny z obowiązującymi normami GMP, a także przepisami globalnymi. Nasz zespół ekspertów regulacyjnych jest biegły w globalnych ramach regulacyjnych, aby przyspieszyć wprowadzanie produktów biologicznych. Zapewniamy identyfikowalne procesy produkcyjne, produkty wysokiej jakości, a także zgodność z zasadami amerykańskiej FDA i unijnej EMA. Australia TGA i chiński NMPA są również zadowolone. Yaohai BioPharma pomyślnie przeszła audyt na miejscu przez Kwalifikowaną Osobę (QP) Unii Europejskiej dla naszego systemu jakości GMP, a także naszego zakładu produkcyjnego. Ponadto, zaliczyliśmy pierwsze audyty certyfikacyjne systemu zarządzania jakością ISO9001, systemu zarządzania środowiskowego ISO14001 i systemu zarządzania bezpieczeństwem i higieną pracy ISO45001.
Yaohai Bio-Pharma, jeden z 10 najlepszych producentów produktów biologicznych, specjalizuje się w fermentacji mikrobiologicznej. Stworzyliśmy zaawansowany zakład wyposażony w nowoczesne urządzenia i silne możliwości produkcyjne RD. Posiadamy pięć linii produkcyjnych substancji leczniczych, które są zgodne z wymogami GMP dotyczącymi fermentacji mikrobiologicznej i oczyszczania, a także dwie linie napełniania i wykańczania, które są zautomatyzowane dla wkładów, fiolek, a także wstępnie napełnionych strzykawek. Dostępne skale fermentacji wahają się od 100 l do 500 l, 1000 l i 2000 l. Protokół transkryptu in vitro dla długiego RNA dla przelotek wynosi od 1 ml do 25 ml, podczas gdy specyfikacje wstępnie napełnionych strzykawek i napełniania wkładów obejmują 1-3 ml. Nasz warsztat produkcyjny jest zgodny z cGMP i gwarantuje stałe dostawy próbek klinicznych, a także artykułów komercyjnych. Nasz zakład produkuje duże cząsteczki, które są wysyłane na cały świat.
Yaohai Bio-Pharma ma doświadczenie w produkcji leków biologicznych, które są tworzone z mikroorganizmów. Oferujemy rozwiązania RD na zamówienie, a także usługi produkcyjne, minimalizując potencjalne ryzyko. Pracowaliśmy z różnymi technikami, takimi jak rekombinowane podjednostki komórkowe, szczepionki (w tym peptydy), czynniki wzrostu, hormony i protokół transkryptu in vitro dla długiego RNA. Specjalizujemy się w wielu mikroorganizmach, takich jak drożdże, wydzielanie pozakomórkowe i wewnątrzkomórkowe (wydajność do 15 g/l) oraz bakterie, rozpuszczalne wewnątrzkomórkowe i ciała inkluzyjne (wydajność do 10 g/l). Opracowaliśmy również platformę fermentacyjną BSL-2 do tworzenia szczepionek bakteryjnych. Mamy udokumentowane doświadczenie w ulepszaniu procesów produkcyjnych, zwiększając tym samym wydajność i obniżając koszty. Mamy wysoce wydajny zespół technologiczny, aby zapewnić terminową i wysokiej jakości dostawę projektów. Pomaga nam to szybciej wprowadzać na rynek Twoje wyjątkowe produkty.
Yaohai Bio-Pharma jest wiodącym producentem protokołu transkryptu in vitro dla długiego RNA CDMO. Naszym głównym celem jest produkcja szczepionek i środków terapeutycznych przeciwko drobnoustrojom w celu leczenia zwierząt domowych, ludzi i zwierząt. Posiadamy najnowocześniejsze platformy technologii RD i produkcji, które obejmują cały proces produkcyjny, od inżynierii szczepów drobnoustrojów, przez przetwarzanie banków komórek i projektowanie metod, po produkcję kliniczną i komercyjną, zapewniając, że możemy zagwarantować pomyślne dostarczenie najbardziej zaawansowanych rozwiązań. Zgromadziliśmy ogromną ilość wiedzy w dziedzinie przetwarzania biologicznego drobnoustrojów. Ponad 200 projektów zostało pomyślnie ukończonych i pomagamy naszym klientom przestrzegać przepisów, takich jak przepisy US FDA, a także EU EMA. Pomagamy im również poruszać się po australijskim TGA i chińskim NMPA. Jesteśmy w stanie szybko reagować na wymagania rynku i oferować dostosowane usługi CDMO dzięki naszemu doświadczeniu i wiedzy fachowej.