Penghunian tapak N-glikosilasi ialah ciri fisiologi glikoprotein dan terutamanya menghasilkan N-glycan. Perkhidmatan analisis penghunian tapak N-glikosilasi Yaohai Bio-Pharma dijalankan melalui penghadaman, pelepasan, pengayaan dan analisis menggunakan Kromatografi Cecair-Electrospray Ionization Mass Spectrometri-Mass Spectrometri (LC-ESI-MS/MS).
Kami telah terlibat dalam Pencirian Struktur Protein pelbagai molekul besar, termasuk Vaksin Subunit Rekombinan, Nanobodies/VHHs/ Antibodi domain Tunggal (sdAbs), Fragmen Antibodi, Hormon/Peptida, Sitokin, Faktor Pertumbuhan (GF), Enzim, Kolagen, dan lain-lain.
Keperluan Kawal Selia untuk Penghuni Tapak N-glikosilasi
Menurut garis panduan ICH Q6B, “untuk glikoprotein, kandungan karbohidrat (gula neutral, gula amino dan asid sialik) ditentukan. Tambahan pula, struktur rantai karbohidrat, corak oligosakarida (profil antena), dan tapak glikosilasi rantai polipeptida dianalisis setakat yang mungkin.
Kaedah Analisis
| Analisis |
Kaedah |
| Penghunian tapak N-glikosilasi |
LC-MS selepas pencernaan deglycosylase dan protease |
Prosedur
1. Pencernaan protein protein untuk menghasilkan serpihan peptida kecil.
2. Pembebasan N-glycan menggunakan endoglycosidase H atau PNGase F. Endoglycosidase H memutuskan ikatan antara dua residu GlcNAc dalam teras glycans berkaitan N, manakala PNGase F ialah glikoamidase yang memutuskan ikatan antara GlcNAc dan Asn, membebaskan keseluruhan rantai gula dan menukar Asn kepada Asp dengan peningkatan jisim 1-Da.
3. Pengayaan N-glikopeptida melalui HILIC (Kromatografi Cecair Interaksi Hidrofilik)
4. Analisis penghunian tapak glikosilasi berkait-N menggunakan LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
