Kehadiran tapak N-glikosilasi adalah ciri fisiologi glikoprotein dan terutamanya menghasilkan N-glikan. Perkhidmatan analisis kehadiran tapak N-glikosilasi Yaohai Bio-Pharma dilaksanakan melalui pencernaan, pelepasan, pengayaan dan analisis menggunakan Kromatografi Cecair-Elektrospray Ionisasi Spektrometer Massa-Spektrometer Massa (LC-ESI-MS/MS).
Kami telah terlibat dalam Penakrifan Struktur Protein bagi pelbagai molekul besar, termasuk Vaksin Subunit Rekombinan, Nanobodies/VHHs/ Antibodi Single-domain (sdAbs), Fragmen Antibodi, Hormon/Peptide, Sitokina, Faktor Pertumbuhan (GF), Enzim, Kolagen, dll.
Kebuthan Pengawalan bagi Kehadiran Tapak N-glikosilasi
Mengikut panduan ICH Q6B, “bagi glikoprotein, kandungan karbohidrat (gula neutral, gula amino, dan asid sialik) ditentukan. Selain itu, struktur rantai karbohidrat, pola oligosakarida (profil antena), dan lokasi pengglikosilan rantai polipeptida dianalisis sejauh yang mungkin.”
Kaedah Analisis
| Analisis |
Kaedah |
| Kehadiran Tapak N-Glikosilasi |
LC-MS selepas pencernaan deglikosilase dan protease |
Prosedur
1. Pencernaan protein untuk menghasilkan pecahan peptida kecil.
2. Pelepasan N-glikan menggunakan endoglikosidase H atau PNGase F. Endoglikosidase H memutus ikatan di antara dua residen GlcNAc dalam inti glikan N-tersambung, manakala PNGase F adalah satu glycoamidase yang memutus ikatan di antara GlcNAc dan Asn, melepaskan seluruh rantai gula dan menukarkan Asn kepada Asp dengan peningkatan jisim 1-Da.
3. Pengayaan N-glikopeptida melalui HILIC (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography)
4. Analisis tempat N-tersambung pengglikosilan menggunakan LC-ESI-MS/MS.
MS
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
BE
MK
UR
BN
