Protein rekombinan sering melihat oksidasi rantai sisi asam amino yang terpapar, seperti triptofan (Trp) dan metionin (Met), yang mengubah sifat fizikokimia protein. Perubahan ini mungkin pada gilirannya menyumbang kepada perubahan fungsi biologi protein yang terjejas, seperti kehilangan ikatan, pengurangan aktiviti enzim, pembersihan yang tidak dijangka dengan laju. Protein adalah sasaran penting untuk tindak balas oksidatif kerana ia bereaksi dengan cepat dengan oksidan dan banyak wujud dalam sel, jaringan ekstraseluler, dan cecair badan.
Oleh itu, memantau oksidasi protein adalah kritikal untuk pembangunan bi farmaseutikal yang berjaya.
Yaohai Bio-Pharma menawarkan perkhidmatan analisis oksidasi asam amino, yang membolehkan anda menentukan oksidasi asam amino oleh Kromatografi Cecair-Mass Spektrometri (LC-MS).
Kami telah terlibat dalam Penentuan Struktur Protein bagi pelbagai molekul besar, termasuk Vaksin Subunit Rekombinan, Nanobodies/ VHHs/ Antibodi domain-tunggal (sdAbs), Fragmen Antibodi, Hormon/Peptides, Sitokina, Faktor Pertumbuhan (GF), Enzim, Kolagen, dll.
Kebutuhan Peraturan untuk Pengoksidaan Asid Amino
Mengikut panduan ICH Q6B, bentuk yang dioxidakan mungkin boleh dikesan dan ditakrifkan oleh kaedah analisis kromatografi, elektroforesis dan/atau kaedah lain yang relevan (contohnya, Kromatografi Likuid Daya Tinggi (HPLC), elektroforesis kapilari, spektroskopi jisim, disiroisme bulat).
Kaedah Analisis
| Analisis |
Kaedah |
| Oksidasi Asid Amino |
LC-MS, Kromatografi Likuid Daya Tinggi Fasa Songsang (RP-HPLC) atau Kromatografi Interaksi Hidrofob Tinggi Prestasi Likuid (HIC-HPLC) dan spektrometri jisim |
Prosedur Analisis
1. Penyediaan Sampel
2. LC-MS
3. Analisis data
Residu Tryptophan (Trp) sangat rentan terhadap oksidasi kerana reaktiviti yang tinggi bagi indol aromatik dengan spesis oksigen reaktif. Oksidasi Trp memerlukan beberapa pendedahan residu Trp yang biasanya tersembunyi dalam struktur tiga dimensi protein.
Walau bagaimanapun, apabila residu Trp dioxidakan, mereka boleh bertransformasi kepada pelbagai produk dengan sifat yang sangat berbeza daripada Trp asal. Laluan yang paling umum untuk oksidasi Trp termasuk pembentukan N-formylkinurenin (Perbezaan jisim: +32).
Amino asid yang biasa dioxidakan adalah methionine. Atom sulfur dalam residu Met boleh menerima sama ada satu atau dua atom oksigen yang menyebabkan pembentukan sulfoxide (Perbezaan jisim: +16) atau sulfone (Perbezaan jisim: +32), secara berturutan. Modifikasi ini agak umum disebabkan oleh pendedahan permukaan yang tinggi Met secara tipikal.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
