N-글리코실화 위치 점유율은 글리코단백질의 생리적 특징으로 주로 N-글리칸을 생성합니다. 야오하이 바이오-파마의 N-글리코실화 위치 점유율 분석 서비스는 액체 크로마토그래피-전기분무 이온화 질량분광계-질량분광계 (LC-ESI-MS/MS)를 사용한 소화, 방출, 풍부화 및 분석을 통해 수행됩니다.
우리는 재조합 서브유닛 백신, 나노바디/VHHs/단일영역 항체(sdAbs), 항체 조각, 호르몬/펩타이드, 사이토카인, 성장 인자(GF), 효소, 콜라겐 등을 포함한 다양한 대분자의 단백질 구조 특성 분석에 참여해 왔습니다.
N-글리코실화 위치 점유율에 대한 규제 요구사항
ICH Q6B 가이드라인에 따르면, “글리코단백질의 경우 당 함량(중성 당, 아미노 당 및 시알릭 산)이 결정됩니다. 또한 당 사슬의 구조, 올리고당 패턴(안테나 프로필), 그리고 다펩타이드 사슬의 글리코실화 위치가 가능한 한 최대한 분석됩니다.”
분석 방법
| 분석 |
방법 |
| N-글리코실화 부위 점유율 |
탈당화효소 및 단백질 분해효소 소화 후 LC-MS |
절차들
1. 단백질을 소화하여 작은 펩티드 조각을 생성합니다.
2. 엔도글리코시다제 H 또는 PNGase F를 사용하여 N-당사슬을 방출합니다. 엔도글리코시다제 H는 N-링크 당사슬 핵의 두 글루코스아민(GlcNAc) 잔기 사이의 결합을 절단하며, PNGase F는 글루코스아민과 아스파라긴 사이의 결합을 절단하여 전체 당사슬을 방출하고 아스파라긴을 아스파르트산으로 변환하며 질량이 1-Da 증가합니다.
3. HILIC(수용성 상호작용 액체 크로마토그래피)를 통한 N-당펩티드 농축
4. LC-ESI-MS/MS를 사용한 N-링크 당화 부위 점유율 분석.
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