N-글리코실화 부위 점유는 당단백질의 생리학적 특징이며 주로 N-글리칸을 생성합니다. Yaohai Bio-Pharma의 N-글리코실화 현장 점유 분석 서비스는 액체 크로마토그래피-전기분무 이온화 질량분석법-질량분석법(LC-ESI-MS/MS)을 사용하여 소화, 방출, 농축 및 분석을 통해 수행됩니다.
우리는 재조합 하위 단위 백신, 나노바디/VHH/단일 도메인 항체(sdAbs), 항체 단편, 호르몬/펩타이드, 사이토카인, 성장 인자(GF), 효소, 콜라겐, 등.
N-글리코실화 현장 점유에 대한 규제 요건
ICH Q6B 가이드라인에 따르면, “당단백질의 경우 탄수화물 함량(중성당, 아미노당, 시알산)이 결정됩니다. 또한, 탄수화물 사슬의 구조, 올리고당 패턴(안테나 프로필), 폴리펩티드 사슬의 글리코실화 부위가 가능한 한 최선으로 분석됩니다."
분석방법
| 분석 |
행동 양식 |
| N-글리코실화 부위 점유 |
데글리코실라제 및 프로테아제 분해 후 LC-MS |
절차
1. 단백질의 단백질 소화로 작은 펩타이드 단편을 생성합니다.
2. 엔도글리코시다제 H 또는 PNGase F를 사용한 N-글리칸 방출. 엔도글리코시다제 H는 N-연결 글리칸의 코어에 있는 두 GlcNAc 잔기 사이의 결합을 절단하는 반면, PNGase F는 GlcNAc와 Asn 사이의 결합을 절단하여 전체를 해방시키는 글리코아미다제입니다. 당 사슬은 1-Da의 질량 증가와 함께 Asn을 Asp로 전환시킵니다.
3. HILIC(친수성 상호작용 액체 크로마토그래피)을 통한 N-글리코펩타이드 농축
4. LC-ESI-MS/MS를 사용한 N-연결 글리코실화 부위 점유 분석.
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