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펩타이드 매핑

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미생물 CDMO

펩타이드 매핑

액체 크로마토그래피-질량 분광계(LC-MS) 기반의 펩타이드 매핑 데이터는 네이티브 및 재조합 단백질의 1차 구조와 고차 구조에 대한 대량의 정보를 제공합니다. 이는 아미노산 서열 커버리지, 후속 변형(PTMs, 예: 당화, 산화, 탈아미드화), 이황화 결합 등이 포함됩니다.

야오하이 바이오-파마는 귀하의 대상 단백질에 대해 LC-MS를 사용한 펩타이드 매핑 분석 서비스를 제공하여 귀하의 단백질 구조 연구를 가속화합니다.

우리는 재조합 서브유닛 백신, 나노바디/VHHs/단일영역 항체(sdAbs), 항체 조각, 호르몬/펩타이드, 사이토카인, 성장 인자(GF), 효소, 콜라겐 등을 포함한 다양한 대분자의 단백질 구조 특성 분석에 참여해 왔습니다.

펩타이드 매핑에 대한 규제 요구사항

ICHQ6B 가이드라인은 다음과 같이 권장합니다. "적절한 효소 또는 화학물질을 사용하여 제품을 이산 펩타이드로 선택적으로 분해하고, 생성된 펩타이드 조각을 HPLC 또는 기타 적절한 분석 절차를 통해 분석합니다. 가능하면 아미노산 구성 분석, N-말단 시퀀싱 또는 질량 분광법(MS)과 같은 기술을 사용하여 펩타이드 조각을 식별해야 합니다. 적절히 검증된 방법을 사용한 활성 물질 또는 의약품(DP)의 펩타이드 매핑은 배치 출시를 위해 원하는 제품 구조를 확인하는 데 자주 사용되는 방법입니다."

분석 방법
분석 방법
펩타이드 매핑 프로테아제 소화 및 액체 크로마토그래피-질량 분광법(LC-MS)
분석 절차

1. 환원 및 알킬화

목표는 이황화물 결합을 줄이고 생성된 자유 티올을 차단하는 것입니다. 이황화물 결합을 줄임으로써 단백질 구조를 열어 proteolytic 소화를 더 효율적으로 만듭니다. 또한 다중 사슬 단백질의 경우 사슬 간에 연결된 이황화물 결합(예: 단일 클론 항체, mAbs)을 분리합니다.

2. 효소를 사용한 단백질 분해

목표는 단백질을펩타이드로 분해하는 것입니다. 우리는 단백질의 이론적 서열과 효소에 의한 단백질의 이론적 분해에 대한 지식을 기반으로 효소를 선택했습니다. 이러한 방식으로 효소를 선택하면 최상의 펩타이드 매핑 분석 결과를 얻을 수 있습니다.

3. 분해된 펩타이드 분석 온라인 역상 고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 자외선(UV) 및 전기분무-질량분광 검출(LC/ES-MS)을 수행합니다.

LC(역상-LC)를 이용한 극성에 따른 펩타이드 분리

펩타이드가 LC 컬럼에서 용출될 때, 질량 분광계는 펩타이드의 서열을 결정하는 데 필요한 질량 정보와 단편 이온 정보를 생성합니다. 우리는 이 서열 정보를 사용하여 펩타이드의 정체성을 확인하고 기본적인 정보를 제공합니다.

또한 펩타이드가 LC 컬럼에서 질량 분광계 소스로 들어갈 때 단편화 정보를 생성할 수도 있습니다. 연구의 요구 사항에 따라 이는 선택적 LC-MS/MS 또는 비선택적 방식으로 진행되며, 이를 tandem MS의 일종으로 간주할 수 있습니다.

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