Kontrola kvalitete i primjena rekombinantnih proteina

Kontrola kvalitete rekombinantnih proteina ključna je za pouzdanost i ponovljivost eksperimentalnih podataka. Svaki korak, od dizajna projekta do procesa proizvodnje, zahtijeva stroge strategije kontrole kvalitete.

Strategije kontrole kvalitete

Industrijski sektor pridržava se strogih standardnih operativnih procedura, dok akademska zajednica treba unaprijediti stručno znanje kako bi poboljšala ponovljivost podataka. Proteini sa specifičnom biološkom primjenom ili biokemijskim karakteristikama zahtijevaju prilagođene strategije kontrole kvalitete (QC).

Izazovni primjeri i rješenja

Yaohai Bio-Pharma može se pohvaliti velikim iskustvom u proizvodnji i pročišćavanju rekombinantnih proteina, zajedno s timom stručnjaka, osiguravajući da vaša proizvodnja proteina bude dovršena s visokom čistoćom. Iskorištavajući naše iskustvo iz stotina projekata, Yaohai ljubazno sažima kako optimizirati pročišćavanje proteina.

Proteini koji vežu nukleinske kiseline: Potrebni su koraci uklanjanja nukleinske kiseline, kao što su nukleaze ili taloženje PEI. Omjer A260nm/A280nm prati se kako bi se otkrila kontaminacija nukleinskom kiselinom.

Mišji feritin teški lanac 1 za cryo-EM: Potrebno je optimizirati korake pročišćavanja i dodati nukleaze kako bi se smanjio omjer A260nm/A280nm i osigurala čistoća proteina.

Ljudski kimerni protein dsRBEC: Za lizu stanica koristi se pufer koji sadrži ureu, nakon čega slijedi presavijanje na stupcu kako bi se dobili funkcionalno aktivni proteini.

Proteini koji vežu dvovalentne katione: Specifični dvovalentni kationi moraju se dodati tijekom ekspresije i pročišćavanja, a kelatne agense treba izbjegavati.

Željezo-sumporni proteini: Imidazol treba izbjegavati kako bi se spriječio poremećaj [2Fe ± 2S] klastera, čime se osigurava pravilno savijanje i funkcija proteina.

Topivi fragment LLT1: Mutant dizajn optimizira stvaranje disulfidne veze i savijanje proteina, što rezultira stabilnim proteinima visokog prinosa.

Kristalizacija CLK1 kinaze: Koekspresija s λ-fosfatazom uklanja fosfate s mjesta fosforilacije, a kromatografija isključenja veličine (SEC) i kromatografija anionske izmjene koriste se za dobivanje homogenog CLK1 bez heterogene fosforilacije.

Proteini za upotrebu antigena: Procjena čistoće je neophodna kako bi se izbjegla kontaminacija visoko imunogenim proteinima. Za antitijela strukturnog epitopa mora se održati trodimenzionalna konformacija antigena.

Proteini skloni agregaciji: Strategije kao što su probir različitih sojeva i snižavanje temperatura uzgoja koriste se kako bi se ograničili problemi agregacije, a osmišljene su i strategije brzog pročišćavanja.

Uklanjanje endotoksina: Metode poput kromatografije pozitivnog naboja i kromatografije afiniteta polikation liganda uklanjaju endotoksine, osiguravajući da su razine LPS-a ispod granica primjene.

Proteinski kompleksi: Podjedinice se eksprimiraju odvojeno i sastavljaju in vitro ili ko-ekspresiraju u obliku funkcionalnih kompleksa. Cjelovitost kompleksa ocjenjuje se homogenošću i molarnom masom.

Zaključak

Proizvodnja proteina počinje strateškim dizajnom, uzimajući u obzir biokemijska svojstva i primjene. Tijekom ekspresije, pročišćavanja i kontrole kvalitete, uvjeti i metode su optimizirani za stabilnost, neagregaciju i prirodno stanje. Pročišćeni proteini služe raznim daljnjim upotrebama, poput biofizičke karakterizacije.

Yaohai Bio-Pharma također aktivno traži institucionalne ili pojedinačne globalne partnere i nudi najkonkurentniju naknadu u industriji. Ukoliko imate pitanja, slobodno nas kontaktirajte: [email protected]