Optimiziranje procesa pročišćavanja rekombinantnog humanog inzulina

Posljednjih godina porast broja oboljelih od dijabetesa povećao je potražnju za inzulinom, ali pristupačnog inzulina nedostaje. Učinkovita, ekonomična proizvodnja inzulina je ključna. Uglavnom proizvedena putem Escherichie coli (E. coli) i kvasca zbog brzog rasta i niske cijene, E. coli se suočava sa složenom daljnjom preradom.

Pregled nizvodne obrade:

Pročišćavanje rekombinantnog humanog inzulina iz inkluzijskih tijela E. coli uključuje višestruke korake, uključujući obnavljanje, ispiranje, solubilizaciju i oksidaciju, cijepanje, izmjenu pufera, kromatografsko pročišćavanje, taloženje, renaturaciju, enzimsko cijepanje i formulaciju.

Yaohai Bio-Pharma može se pohvaliti velikim iskustvom u proizvodnji i pročišćavanju rekombinantnog inzulina, zajedno s timom stručnjaka, osiguravajući da vaša proizvodnja inzulina bude završena uz visoku učinkovitost. Iskorištavajući naše iskustvo iz stotina projekata, Yaohai ljubazno sažima kako optimizirati nizvodni proces pročišćavanja za rekombinantni ljudski inzulin.

Inkluzija Oporavak i pranje tijela:

Stanice se uništavaju mehaničkim metodama (kao što je ultrazvučna obrada, homogenizacija pod visokim pritiskom) ili tretmanom lizozimom, nakon čega slijede puferi za pranje (koji sadrže ureu, Triton X-100 itd.) kako bi se uklonile nečistoće. Tijekom pranja potrebno je optimizirati parametre kako bi se osigurala kvaliteta proteina uz kontrolu troškova.

Topljivost i oksidacija inkluzijskog tijela:

Denaturanti visoke koncentracije (kao što su gvanidin hidroklorid i urea) koriste se za solubilizaciju inkluzijskih tijela, uz dodatak ditiotreitola ili β-merkaptoetanola kako bi se spriječilo stvaranje netočnih disulfidnih veza. pH i temperatura značajno utječu na reakcije otapanja i oksidacije.

Cijepanje i izmjena pufera:

Cijepanje cijanogen bromidom koristi se za uklanjanje N-terminalne početne aminokiseline, ali predstavlja problem toksičnosti i niske specifičnosti. Putem dijalize, ultrafiltracije ili kromatografije isključenja veličine, izmjena pufera uklanja štetne reagense u pripremi za sljedeće operacije.

Kromatografsko pročišćavanje i taloženje:

Višestruke kromatografske tehnike koriste se za pročišćavanje inzulina, uključujući afinitetnu kromatografiju, kromatografiju ionske izmjene, kromatografiju reverzne faze, kromatografiju hidrofobne interakcije i kromatografiju isključenja veličine. Metode taloženja, kao što su pH taloženje i kristalizacija cinka, koriste se za uklanjanje nečistoća i koncentriranje proteina.

Renaturacija:

Solubilizirani protein se razrijedi u puferu za renaturaciju kako bi se pospješilo pravilno stvaranje disulfidnih veza i savijanje proteina. Tekućinska kromatografija i dijaliza također su metode koje se koriste za renaturaciju.

Enzimsko cijepanje i formulacija:

Tripsin i karboksipeptidaza B koriste se za cijepanje C-peptida, stvarajući aktivni heterodimer inzulina. Konačno, kristalizacija i liofilizacija se koriste za uklanjanje zaostalih soli i pufera, pripremajući stabilnu formulaciju. Specifični aditivi (kao što su cink i protamin) dodaju se kako bi se zadovoljile različite kliničke potrebe.

Zaključak:

Nizvodna obrada inzulina iz E. coli je složeno. Budući fokus trebao bi biti na optimizaciji ovih koraka za učinkovitu, ekonomičnu proizvodnju kako bi se zadovoljila potražnja i smanjili troškovi.

Yaohai Bio-Pharma također aktivno traži institucionalne ili pojedinačne globalne partnere i nudi najkonkurentniju naknadu u industriji. Ukoliko imate pitanja, slobodno nas kontaktirajte: [email protected]