Optimizacija procesa čišćenja za rekombinantni ljudski insulin

U posljednjih nekoliko godina, povećanje broja bolesnika s dijabetesom potaknulo je potražnju za insulinom, ali je pristupačan insulin u nedostatku. Od ključne je važnosti učinkovita i ekonomična proizvodnja insulina. U glavnom proizvedeno putem Escherichia coli (E. coli) i kvasca zbog brzog rasta i niske cijene, E. coli suočava se s složenom procesom nizvodno.

U skladu s člankom 3. stavkom 1.

Čišćenje rekombinantnog ljudskog insulina od E. coli uključivanja tijela uključuje više koraka, uključujući oporavak, pranje, rastvorenje i oksidaciju, rascjep, razmjenu tampona, hromatografsko čišćenje, obor, renaturaciju, enzimski rascjep i formulaciju.

Yaohai Bio-Pharma ima veliko iskustvo u proizvodnji i prečišćavanju rekombinantnog insulina, zajedno s timom stručnjaka, koji osiguravaju da se vaša proizvodnja insulina završi s visokom efikasnošću. Iskoristivši naše iskustvo iz stotina projekata, Yaohai lijepo sažima kako optimizirati proces pročišćavanja za rekombinantni ljudski insulin.

Obnovo i pranje inkluzivnih tijela:

Ćelije se razbijaju pomoću mehaničkih metoda (poput ultrazvučnog raslađivanja, visokoprskog homogenizatora) ili liječenja lizosomom, nakon čega se koriste prane bufferei (koji sadrže ureu, Triton X-100 itd.) da bi se uklonile nečistine. Tijekom pranja potrebno je optimizirati parametre kako bi se osigurala kvaliteta proteina uz kontrolu troškova.

Rastvaranje inkluzivnih tijela i oksidacija:

Koriste se denaturanti u visokoj koncentraciji (poput hidrohidrida guanidina i uree) za rastvaranje inkluzivnih tijela, uz dodatak ditiotreitol-a ili β-merkaptoetanol-a kako bi se sprečilo nastajanje netočnih disulfidnih veza. pH i temperatura značajno utječu na reakcije rastvaranja i oksidacije.

Otpinjanje i zamjena buffera:

Cianogen bromida se koristi za uklanjanje N-terminalnog početnog aminokiseline, ali uzrokuje probleme s toksičnošću i niskom specifičnošću. Putem dialize, ultrafiltracije ili kromatografije po veličini, zamjena bufera uklanja štetne reagente pripremajući uzorak za nadaljnje operacije.

Kromatografska čišćenja i usišavanja:

Više kromatografskih tehnika se upotrebljava za čišćenje insulina, uključujući afinitetnu kromatografiju, jonsku izmjenu kromatografije, obrnutu fazu kromatografije, hidrofobno interakcijsku kromatografiju i kromatografiju po veličini. Metode usišavanja, kao što su usišavanje prema pH-u i cinkova kristalizacija, koriste se za uklanjanje nepoželjnih tvari i koncentraciju proteina.

Renaturiranje:

Rastvoren protein se razbijanja u renaturacijskom buferu kako bi se promotirala ispravna formiranja disulfidnih veza i savijanja proteina. Kromatografija tečne faze savijanja proteina i dializa također se koriste kao metode za renaturiranje.

Enzimatsko štapanje i formuliranje:

Trypsin i carboxipeptidaza B koriste se za odsecanje C-peptida, čime se formira aktivni heterodimer insulina. Na kraju, kristalizacija i liofilizacija upotrebljavaju se za uklanjanje ostalih soli i bufera, pripremajući stabilnu formulaciju. Dodaju se specifični aditivi (poput cinka i protamina) kako bi se ispunile različite kliničke potrebe.

Zaključak:

Obrađivanje insulina u daljnjem procesu iz E. coli je složeno. Budući fokus trebao bi biti na optimiziranju ovih koraka za učinkovitu i ekonomsku proizvodnju kako bi se ispuni trgovačka potražnja i smanjili troškovi.

Yaohai Bio-Pharma također aktivno traži globalne partnerе, institucionalne ili pojedinačne, i nudi najkonkurentniju kompenzaciju u industriji. Ako imate bilo kakva pitanja, slobodno nas kontaktirajte: [email protected]