Optimiziranje staničnog integriteta E. coli za Biopharma proizvodnju

U području biofarmaceutike, Escherichia coli (E. coli) ima vitalnu ulogu kao domaćin za ekspresiju rekombinantnih proteina. Stanični integritet E. coli ključan je za prinos proteina, kvalitetu i troškove proizvodnje. Taj integritet prvenstveno uključuje strukturu i funkciju unutarnje membrane (IM) i vanjske membrane (OM).

Yaohai Bio-Pharma ima 15 godina iskustva u fermentaciji E. coli i ekspresiji rekombinantnog proteina. Koristimo različite strategije za održavanje visokog staničnog integriteta E. coli, prinos plazmida prelazi 1g/L unutar ciklusa uzgoja od 30 sati. Oslanjajući se na veliko iskustvo u ekspresiji mikroba, Yaohai Bio-Pharma je sažela nekoliko učinkovitih strategija za praćenje i poboljšanje staničnog integriteta E. coli tijekom biofarmaceutske proizvodnje.

Tehnike za praćenje staničnog integriteta E. coli

Protočna citometrija: koristi fluorescentne boje za razlikovanje staničnih stanja, kao što je propidij jodid za otkrivanje održivosti stanica i SYTO9 za procjenu propusnosti OM. Međutim, to zahtijeva visoke troškove mrlja i složene operacije.

Kolorimetrijske metode: odražavaju staničnu lizu otkrivanjem sadržaja DNK, aktivnosti enzima itd. u supernatantu, kao što je korištenje kompleta reagensa PicoGreen i testova aktivnosti alkalne fosfataze. Ove su metode, međutim, glomazne i zahtijevaju skupe reagense.

Tekuća kromatografija visoke učinkovitosti: Koristi se za izvanmrežno otkrivanje koncentracija izvanstaničnih proizvoda za procjenu istjecanja OM. Ipak, njegova automatizacija je složena, a vrijeme analize dugo.

Tehnike vibracijske spektroskopije: Kao što je spektroskopija blizu infracrvenog i srednjeg infracrvenog spektra, koje imaju potencijalne primjene, ali zahtijevaju prevladavanje izazova spektralne interferencije i analize podataka.

Dielektrična spektroskopija: Procjenjuje integritet membrane mjerenjem impedancije staničnih suspenzija, omogućavajući online praćenje u stvarnom vremenu. Međutim, osjetljiv je na smetnje i kalibracija je teška.

Biosenzori: mogu otkriti spojeve koji su iscurili iz stanica ili periplazme, ali se suočavaju s problemima poput poteškoća s regeneracijom senzora.

Mjerenja viskoznosti i gustoće: niske cijene i brza analiza, ali nedostatak selektivnosti i zahtijevaju razmatranje podataka o više serija za prosudbu.

Čimbenici koji utječu na stanični integritet

Inženjering soja: mijenja integritet OM putem genetskog inženjeringa, kao što je mutacija lipoproteinskih gena, ali može utjecati na rast soja.

Inducirani stres: prekomjerna ekspresija rekombinantnih proteina dovodi do metaboličkog opterećenja, utječući na staničnu fiziologiju. Stoga je neophodna razumna regulacija razine ekspresije.

Brzina hranjenja supstratom: I pretjerano visoke i niske stope hranjenja utječu na lizu stanica i integritet OM.

Temperatura i prozračivanje: Visoke temperature i niska dostupnost kisika povećavaju stres ekspresije odnosno curenje OM-a, ali specifični učinci variraju.

Osmotici: koriste se za oslobađanje periplazmatskih proteina, ali oštećuju vitalnost stanica, ograničavajući njihovu primjenu.

Zaključak Buduća istraživanja moraju dublje proučiti mehanizme i uvjete popravka membrane kako bi se precizno kontrolirao integritet stanične membrane. Očekuje se da će optimizacija metoda praćenja i analiza čimbenika utjecaja poboljšati kvalitetu proizvoda, čime će se potaknuti razvoj biofarmaceutske industrije.

Također aktivno tražimo institucionalne ili pojedinačne globalne partnere. Nudimo najkonkurentnije naknade u industriji. Ako imate pitanja, slobodno nas kontaktirajte na [email protected]