Tänapäeval on Yaohail nii põnev jagada oma pika RNA in vitro transkriptsiooniprotokolli. See on tõhus strateegia, mida teadlased sageli kasutavad RNA tootmiseks laboris. Sel viisil saavad teadlased toota märkimisväärselt suurel hulgal pikki RNA-sid, mis on erinevate bioloogiliste valdkondade uurimiseks hädavajalikud. Siin pakume samm-sammult juhendit pikkade RNA-de valmistamiseks in vitro transkriptsiooni abil. Räägime ka sellest, kuidas saaksime protsessi paremaks muuta ja püüame lahendada mõningaid probleeme, millega pika RNA sünteesimisel kokku puutute.
In vitro transkriptsiooniks on vaja mitmeid olulisi komponente, eriti pikka RNA-d. Peate varustama ensüümi nimega RNA polümeraas, nukleotiidtrifosfaatide (NTP-de) kujul olevaid kirjutusmaterjale, reaktsiooni soodustavat puhvrit ja mõnda DNA malli. Kuidas seda samm-sammult teha, leiate üksikasjaliku juhendi siit:
RNA sünteesi hea toimimise jaoks on väga olulised mitmed tegurid. Eelkõige on oluline magneesiumiioonide kogus puhvris endas. RNA polümeraas vajab suures koguses magneesiumi, et toetada õiget interaktsiooni DNA matriitsiga ja sellele järgnevat RNA voltimist. Teine oluline aspekt, mida tuleb arvestada, on DNA matriitsi kontsentratsioon. Täpsemalt, hea RNA saagise saamiseks peab teil olema piisavalt matriitsi DNA reaktsiooni.
Pika RNA-ga kaasnevad loomulikult oma probleemid. Need probleemid võivad olla seotud RNA lagunemisega, mõjutada RNA voltimist ja struktuure, mis võivad häirida RNA sünteesi. Üks võimalus nende probleemide lahendamiseks on puhvri kohandamine. RNA terviklikuma struktuuri saamiseks saavad teadlased lisada erinevaid spetsiaalseid kemikaale, nagu DTT ja p-merkaptoetanool, et aidata RNA-l õigesti voltida ja vältida selle kokkukleepumist või kokkukleepumist.
Lisaks ei ole kõik pikad RNA tüübid sarnased ja mõned võivad vajada alternatiivseid sünteesimeetodeid. Teadlastel võib olla vaja RNA-sse lisada erifunktsioone, näiteks 5 korgi või polü-A saba lisamine. Kui see on vajalik (nagu hiljem selgitatud), peaksid teadlased kaasama muid ensüüme, nagu guanüültransferaas ja polü(A)polümeraas. Samuti tuleb valida sobiv RNA polümeraasi ensüüm, mis loomulikult võimaldab neil toota rohkem RNA-d. Niipea, kui pikk RNA tuleb sünteesida, peame tuvastama parima seisundi.
Pikad RNA-d in vitro transkriptsioon Pika RNA in vitro transkriptsiooniprotokollil on mitmeid olulisi kasutusviise mitmetes uuringutes, analüüsides ja terapeutilistes ettevõtmistes. See aitab teadlastel mõista RNA struktuuri, selle toimimisviisi ja seda, kuidas nad saavad kaasaegsete tehnoloogiatega geene modifitseerida. Veel üks päev - erinevate haiguste ja nende ravimeetodite, nagu väga kaasaegsete RNA-teraapiate avastamine, uskugem, kui kasulik see sisselugemistehnoloogia võib olla meditsiinile.
Selle protokolli kasutamisel on palju eeliseid. Elektroforeesil põhinev meetod on üldiselt kõige tõhusam ja kulutõhusam viis suurte koguste pika RNA tootmiseks. Lisaks RNA kvaliteedile on teadlaste jaoks oluline tegur ka hea saagis, mis aitab neil uurimistööd teha, eriti kui nad vajavad katseteks suures koguses RNA-d, kuna algul on palju sisendmaterjali. Lisaks on pika RNA in vitro transkriptsioon tavaliselt täpsem ja reprodutseeritavam kui RNA keemiline süntees või rakuline süntees.
Yaohai BioPharma on 10 parimat mikroobide CDMO-d, mis sisaldab pika RNA in vitro transkriptsiooniprotokolli ja regulatiivseid küsimusi. Meil on kvaliteedijuhtimissüsteem, mis on kooskõlas nii kehtivate hea tootmistava standarditega kui ka ülemaailmsete eeskirjadega. Meie regulatiivsete ekspertide meeskond tunneb ülemaailmseid reguleerivaid raamistikke, et kiirendada bioloogilisi käivitamisi. Tagame jälgitavad tootmisprotsessid kvaliteetsed tooted, samuti USA FDA ja EU EMA reeglite järgimise. Rahul on ka Austraalia TGA ja Hiina NMPA. Yaohai BioPharma on edukalt läbinud Euroopa Liidu kvalifitseeritud isiku (QP) kohapealse auditi nii meie GMP kvaliteedisüsteemi kui ka meie tootmisüksuse kohta. Lisaks oleme läbinud esimesed ISO9001 kvaliteedijuhtimissüsteemi, ISO14001 keskkonnajuhtimissüsteemi ja ISO45001 töötervishoiu ja tööohutuse juhtimissüsteemi sertifitseerimisauditid.
Yaohai Bio-Pharma, 10 parimat bioloogiliste toodete tootjat, on mikroobse kääritamise spetsialist. Oleme loonud täiustatud rajatise, mis on varustatud kaasaegsete rajatiste ja tugevate RD-tootmisvõimalustega. Meil on viis ravimainete tootmisliini, mis vastavad GMP nõuetele mikroobse kääritamise ja puhastamise osas, samuti kaks täitmis-viimistlusliini, mis on automatiseeritud kassettide, viaalide ja süstalde jaoks. Saadaolevad käärimiskaalud varieeruvad vahemikus 100L kuni 500L, 1000L ja 2000L. In vitro Transcript Protocol for Long RNA for vias on 1–25 ml, samas kui eeltäidetud süstalde ja kassettide täitmise spetsifikatsioonid hõlmavad 1–3 ml. Meie tootmistsehh on cGMP-ga ühilduv ja tagab pideva kliiniliste proovide ja kaubanduslike toodete tarnimise. Meie tehas toodab suuri molekule, mis saadetakse maakerale.
Yaohai Bio-Pharmal on kogemusi mikroorganismidest loodud bioloogiliste ainete valmistamisel. Pakume eritellimusel TA lahendusi ja tootmisteenuseid, minimeerides samas võimalikke riske. Oleme töötanud erinevate tehnikatega, nagu rekombinantsed rakulised subühikud, vaktsiinid (sh peptiidid), kasvufaktorid, hormoonid ja pika RNA in vitro transkriptsiooniprotokoll. Oleme paljude mikroorganismide spetsialist, nagu pärmi rakuväline ja intratsellulaarne sekretsioon (saagis kuni 15g/L) ja rakusisene lahustuvad bakterid ja inklusioonkeha (saagis kuni 10g/L). Oleme välja töötanud ka BSL-2 fermentatsiooniplatvormi bakteriaalsete vaktsiinide loomiseks. Meil on kogemusi tootmisprotsesside täiustamisel, suurendades seeläbi saagikust ja vähendades kulusid. Meil on väga tõhus tehnoloogiameeskond, et tagada projektide õigeaegne ja kvaliteetne kohaletoimetamine. See aitab meil teie ainulaadsed tooted kiiremini turule tuua.
Yaohai Bio-Pharma on pika RNA CDMO in vitro transkriptsiooniprotokolli juhtiv juht. Meie põhirõhk on olnud mikroobsete vaktsineerimiste ja ravimite tootmisel lemmikloomade, inimeste ja veterinaaride raviks. Meil on tipptasemel RD- ja tootmistehnoloogia platvormid, mis hõlmavad kogu tootmisprotsessi alates mikroobitüvede konstrueerimisest kuni rakupanga töötlemise ja meetodite kavandamiseni kuni kliinilise ja kaubandusliku tootmiseni, tagades sellega, et suudame tagada kõige arenenumate lahenduste eduka tarnimise. Oleme kogunud tohutul hulgal teadmisi biotöötluse mikroobide valdkonnas. Rohkem kui 200 projekti on edukalt lõpule viidud ja aitame oma klientidel järgida selliseid eeskirju nagu USA FDA ja EL EMA. Samuti aitame neil navigeerida Austraalia TGA-s ja Hiina NMPA-s. Tänu oma kogemustele ja teadmistele suudame kiiresti reageerida turunõuetele ja pakkuda kohandatud CDMO-teenuseid.