En comparación con la protección enzimática de dos pasos, el método de protección cotranscripcional de un paso puede reducir significativamente el flujo del proceso. El método está orientado a resultados e implica la adición de análogos de cap a la reacción de transcripción in vitro (IVT). Los análogos de cap se pueden introducir al inicio de la transcripción y se puede obtener ARNm con estructura de cap al finalizar la transcripción. Los análogos de tapa de tercera generación actuales pueden evitar la tapa inversa y agregar directamente la estructura Cap 1 al producto de transcripción.
Por consideraciones de inmunogenicidad in vivo y eficiencia de traducción del ARNm, el proceso IVT a menudo adopta ciertos tipos de NTP modificados, y los nucleótidos modificados comunes son pseudouridina (Ψ), N1-metil-pseudouri-dina (N1Ψ) y 5-metilcitosina (5mC). .
Figura: Diagrama de la reacción cotranscripcional y de limitación del ARNm
Detalle de Servicios
Servicio | Detalle de Servicios | Plazo de entrega (día laborable) |
Limitación cotranscripcional | Respuesta transcripcional in vitro (análogo de Clean Cap) | 1 - 2 |
| Modificaciones de nucleótidos (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Eliminación de plantilla de ADN (DNasa I) |
Optimización de la condición IVT: opcional | Diseño y optimización de componentes de reacción. | 3 - 7 |
Nuestras Características
- Estrategias diversificadas de modificación de nucleótidos
Múltiples estrategias opcionales de modificación de nucleótidos pueden mejorar la expresión de proteínas.
- Sistema de reacción optimizado
Logre una alta tasa de transcripción y una alta eficiencia de limitación.
- Proceso de limitación estable
Lograr una tasa de limitación de más del 95%.
- Control estricto de la RNasa
Prevenga la degradación del ARNm de forma eficaz mediante un control estricto de la ARNasa en el entorno experimental y los consumibles.
Estudio de caso
Yaohai Bio-Pharma ha creado una plataforma madura de proceso de protección cotranscripcional, utilizando análogos de protección limpios para agregar directamente la estructura Cap1 y evitar la protección inversa. Después del pretratamiento estandarizado de la muestra y la detección de electroforesis capilar (CE), la tasa de limitación del ARNm de la proteína fluorescente verde mejorada (eGFP) puede alcanzar más del 95%.
Eficiencia de limitación del ARNm de eGFP de más del 95%
El ARNm de eGFP y el ARNm de mCherry preparados mediante protección cotranscripcional se transfectan en células 293T, respectivamente, y se observa una fuerte señal fluorescente después de 48 h, lo que sugiere que el ARNm se expresa de manera eficiente en células 293T.
Expresión de ARNm de eGFP y ARNm de mCherry en células 293T
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