En cuanto a la producción masiva de ARNm, la transcripción in vitro (IVT) es un método más eficiente y maduro. La reacción IVT adopta ADN plasmídico linealizado que contiene el promotor T7 como plantilla, y el ARNm se sintetiza con nucleósidos trifosfato (NTP) como sustratos en presencia de ARN polimerasa T7.
La modificación de nucleótidos es un gran avance en la exploración del ARNm, donde los sensores de ARN intracelulares reconocen las moléculas de ARNm no modificadas para activar la inmunidad innata. Para consideraciones de inmunogenicidad in vivo y eficiencia de traducción del ARNm, el proceso IVT generalmente emplea ciertos tipos de NTP modificados, y los nucleótidos modificados comunes son pseudouridina (Ψ), N1-metil-pseudouridina (N1Ψ) y 5-metilcitosina (5 mC).
Proceso de transcripción in vitro de ARNm
Diagrama de reacción de transcripción in vitro (IVT)
Detalles de servicios
Servicio opcional | Detalle de Servicios | Plazo de entrega (día laborable) |
Transcripción in vitro (TIV) | IVT, transcripción in vitro | 1 |
| Modificaciones de nucleótidos (Ψ/N1Ψ/5mC, etc.) |
| Eliminación de plantilla de ADN (DNasa I) |
Optimización de la condición IVT: opcional | Diseño y optimización de componentes de reacción IVT. | 2 - 5 |
Nuestras Características
- Estrategias diversificadas de modificación de nucleótidos
Mejorar la estabilidad del ARNm y la expresión de proteínas in vivo.
- Diseño y optimización de pruebas rigurosas
Se puede lograr la preparación de fragmentos de ARNm de hasta 10 kb.
Al optimizar las condiciones de reacción IVT, la tasa de transcripción es de hasta 1:200.
- Control estricto de la RNasa
Un control estricto de la RNasa a través de un entorno experimental y consumibles puede prevenir eficazmente la degradación del ARNm.
Casos de éxito
El sistema de reacción IVT actual está optimizado aproximadamente para sistemas sintéticos con una longitud de aproximadamente 100 nt, no para ARNm de longitud arbitraria. Cuanto más larga es la secuencia de ARNm, más difícil es transcribirla y más propensa a degradarse.
Para preparar secuencias de ARNm personalizadas con una longitud de aproximadamente 10 kb, Yaohai Bio-Pharma preparó con éxito muestras de alta calidad con una alta relación de transcripción de 1:135 y obtuvo 135 μg de productos de ARNm inicialmente purificados después de 1 μg de plásmido linealizado. se transcribió in vitro mediante un diseño experimental riguroso, optimización continua de las condiciones de reacción y control estricto de la RNasa.
Identificación de ARNm (electroforesis en gel de agarosa)
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