Ensayos de potencia basados en células
La importancia del ensayo de potencia del ARNm
Con el rápido desarrollo de vacunas y terapias de ARNm, se necesita un panel específico de métodos de análisis para probar la potencia (definiendo su actividad biológica), que involucra la eficiencia traslacional del ARNm. Estos métodos suelen basarse en la transfección celular y ensayos funcionales de la proteína diana.
Yaohai Bio-Pharma ofrece ensayos de potencia basados en células para sustancias farmacológicas de ARNm o productos LNP, incluida la transfección celular (células 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, etc.) y ensayos ELISA o Western Blotting (WB).
Requisitos reglamentarios para ensayos de potencia
Según las consideraciones regulatorias de la OMS, “La potencia de cada lote de la vacuna final debe determinarse utilizando un método funcional adecuadamente cuantitativo y validado. Los posibles ensayos de potencia in vitro pueden incluir sistemas de transfección basados en células o ensayos sin células”. Y la USP recomendó un “ensayo basado en células” para probar la potencia del ARNm, es decir, la expresión de la proteína objetivo.
Método analítico
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ECONOMÉTRICOS
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Métodos
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Ensayos de potencia
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La transfección celular y la proteína diana identifican:
Células 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, etc.
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Procedimiento
Paso 1. Transfección basada en células con ARNm o ARNm-LNP
Las células se cultivan y se transfectan con ARNm o ARNm-LNP. En detalle, el ARNm se transfecta después de mezclarlo con un reactivo de transfección, mientras que el ARNm-LNP se transfecta directamente en las células. Después de 24-48 horas, clarificar el sobrenadante que contiene la proteína expresada mediante centrifugación.
Paso 2. Ensayos funcionales de la proteína objetivo
Realice ensayos ELISA o WB para evaluar la unión funcional de las proteínas diana.
Casos de éxito
Ensayos de potencia basados en células de muestras de ARNm
Yaohai-BioPharma ha desarrollado un método de ensayo de potencia basado en células para ARNm, que implica cultivo celular, transfección celular y ensayos funcionales de proteínas. Transfectamos ARNm de eGFP, ARNm de mCherry, ARNm de luciferasa, ARNm de proteína de pico en células 293T y detectamos la proteína objetivo mediante fluorescencia, señal luminiscente o coloreada, WB, ELISA.
Ensayos de potencia basados en células de productos de ARNm de Yaohai Bio-Pharma
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