En el proceso de preparación de ARNm de transcripción in vitro (IVT), se requiere ADN plasmídico linealizado como plantilla de transcripción para IVT con la ayuda de la ARN polimerasa T7. El ADN plasmídico de alta calidad es crucial para la transcripción in vitro.
Basado en la plataforma de servicio de preparación de plásmido madura, Yaohai Bio-Pharma puede ofrecer un servicio de preparación de ADN de plásmido linealizado de alta pureza y alto estándar para lograr una transcripción IVT eficiente.
Detalles de servicios
| Proceso | Servicio opcional | Detalle de Servicios | Plazo de entrega (día laborable) |
| Preparación de plásmido circular. | Síntesis de genes | Síntesis de genes (de terceros) | 7 - 10 |
| Amplificación de plásmidos | Amplificación de plásmidos | 2 |
| Extracción de plásmido |
| Preparación de plásmido linealizado. | Linealización y purificación de plásmidos. | Linealización de plásmidos | 1 |
| Purificación de ADN por linealización. |
| Control de calidad del ADN plásmido. | Pureza de concentración | Espectrofotometría ultravioleta (UV) | 1 - 2 |
| Conformación del plásmido | Electroforesis en gel de agarosa (AGE) |
| Electroforesis capilar (CE): opcional |
| Identificar plásmido | Identificación de enzimas de restricción/EDAD |
Nuestras Características
- Plásmido de plantilla de edición gratuita
Selección flexible de métodos de linealización.
- Tasa de recuperación alta
Optimización de los métodos de extracción y purificación de ADN para lograr altas tasas de recuperación.
- Estricto control de calidad
Estándares estrictos de control de procesos, con una tasa de conformación superhélice de muestras de plásmidos para investigación superior al 80 %.
- Proceso de plataforma madura
Servicios de control de calidad y preparación de plásmidos de alto nivel y alta eficiencia para satisfacer las necesidades experimentales.
Estudio de caso
Tomando como ejemplo el producto mRNA_luciferase del catálogo de Yaohai Bio-Pharma, la muestra de plásmido plantilla de transcripción (grado de investigación) tiene una proporción superhelicoidal de más del 90%, una proporción de linealización cercana al 100% y una proporción de transcripción posterior de hasta 1:200 ( ADN plasmídico linealizado:ARNm).
La mRNA_luciferasa obtenida mediante la preparación de un plásmido linealizado como plantilla se transfecta en células 293T y la actividad de reacción enzima-sustrato se evalúa 24 h después de la transfección.
Se puede detectar una fuerte señal obvia de actividad luciferasa, es decir, la proteína luciferasa se expresa eficientemente, lo que sugiere que la pureza de la plantilla de transcripción puede satisfacer completamente el requisito de preparación de ARNm de alta calidad.
Ensayo de relación de plásmido superenrollado
Validación de la expresión de ARNm de luciferasa in vitro
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