La preparación de circRNA requiere RNA lineal como material precursor (precursor de RNA) para la ciclización, donde el precursor de RNA generalmente se prepara utilizando DNA de plásmido linealizado como plantilla de transcripción y se transcribe in vitro con la ayuda de la polimerasa T7 RNA.
Un DNA de plásmido de alta calidad es esencial para la transcripción in vitro (TIV). Basado en la plataforma de servicio madura de preparación de plásmidos, Yaohai Bio-Pharma puede proporcionar un servicio de preparación de DNA de plásmido linealizado de alta pureza y estándar (pDNA) para garantizar la integridad de los productos TIV.
Detalles de los Servicios
| Proceso |
Servicio opcional |
Detalles del Servicio |
Período de Entrega (día laborable) |
| Preparación de Plásmido Circular |
Síntesis de genes |
Síntesis de Genes (Terceros) |
7 a 10 |
| Amplificación de Plásmidos |
Amplificación de Plásmidos |
2 |
| Extracción de Plásmidos |
| Preparación de Plásmidos Linealizados |
Linealización y purificación de plásmidos |
Linealización de plásmidos |
1 |
| Purificación de ADN Linealizado |
| Control de calidad de ADN de plásmido |
Concentración pureza |
Espectrofotometría Ultravioleta (UV) |
1-2 |
| Conformación de plásmido |
Electroforesis en Gel de Agarosa (AGE) |
| Electroforesis Capilar (CE)-Opcional |
| Identificación de plásmidos |
Identificación de enzimas de restricción/AGE |
Nuestras características
- Plantilla de Plásmido Freecut
Selección flexible de métodos de linealización
- Alta Tasa de Recuperación
Optimización de los métodos de extracción y purificación de ADN para lograr altas tasas de recuperación.
- Control de calidad estricto
Estrictos estándares de control de proceso, con una tasa de conformación superhelical de muestras de plásmidos para investigación superior al 80%.
- Plataforma de Proceso Madura
Servicios de preparación y control de calidad de plásmidos de alto estándar y alta eficiencia para satisfacer las necesidades experimentales.
Estudio de Caso
Tomando como ejemplo el producto mCherry circRNA de Yaohai Bio-Pharma, la proporción de superbobinado de las muestras de plásmidos de plantilla de transcripción (grado de investigación) es superior al 70%, con una tasa de linealización cercana al 100%.
el mCherry circRNA se prepara utilizando un plásmido linealizado como plantilla y se transfiere a células 293T. Se detecta una alta expresión de fluorescencia (fluorescencia roja) después de 24 horas de transfección, la cual se intensifica después de 48 horas y aún puede detectarse el séptimo y decimocuarto día después de la transfección.
la proteína mCherry se expresa de manera estable y eficiente, y la pureza de la plantilla de transcripción puede cumplir con el requisito del producto farmacéutico circRNA de alta calidad.
Validación de la expresión in vitro del mCherry circRNA
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