La preparación de CircRNA requiere ARN lineal como material precursor (precursor de ARN) para la ciclación, donde el precursor de ARN generalmente se prepara utilizando ADN plasmídico linealizado como plantilla de transcripción y se transcribe in vitro con la ayuda de la ARN polimerasa T7.
El ADN plasmídico de alta calidad es esencial para la transcripción in vitro (IVT). Basado en la plataforma de servicio de preparación de plásmidos maduros, Yaohai Bio-Pharma puede proporcionar un servicio de preparación de ADN plasmídico linealizado (pDNA) estándar y de alta pureza para garantizar la integridad de los productos IVT.
Detalles de servicios
| Proceso | Servicio opcional | Detalle de Servicios | Plazo de entrega (día laborable) |
| Preparación de plásmido circular. | Síntesis de genes | Síntesis de genes (de terceros) | 7 - 10 |
| Amplificación de plásmidos | Amplificación de plásmidos | 2 |
| Extracción de plásmido |
| Preparación de plásmido linealizado. | Linealización y purificación de plásmidos. | Linealización de plásmidos | 1 |
| Purificación de ADN por linealización. |
| Control de calidad del ADN plásmido. | Pureza de concentración | Espectrofotometría ultravioleta (UV) | 1 - 2 |
| Conformación del plásmido | Electroforesis en gel de agarosa (AGE) |
| Electroforesis capilar (CE): opcional |
| Identificar plásmido | Identificación de enzimas de restricción/EDAD |
Nuestras Características
- Plásmido de plantilla de edición gratuita
Selección flexible de métodos de linealización.
- Tasa de recuperación alta
Optimización de los métodos de extracción y purificación de ADN para lograr altas tasas de recuperación.
- Estricto control de calidad
Estándares estrictos de control de procesos, con una tasa de conformación superhélice de muestras de plásmidos para investigación superior al 80 %.
- Proceso de plataforma madura
Servicios de control de calidad y preparación de plásmidos de alto nivel y alta eficiencia para satisfacer las necesidades experimentales.
Estudio de caso
Tomando como ejemplo el producto mCherry circRNA de Yaohai Bio-Pharma, la proporción superenrollada de muestras de plásmido plantilla de transcripción (grado de investigación) es superior al 70%, con una tasa de linealización cercana al 100%.
El circRNA de mCherry se prepara con un plásmido linealizado como plantilla y se transfecta en células 293T. Se detecta un alto nivel de expresión de fluorescencia (fluorescencia roja) después de 24 horas de transfección, que aumentará después de 48 horas y aún se puede detectar el día 7 y el día 14 después de la transfección.
La proteína mCherry se expresa de manera estable y eficiente, y la pureza de la plantilla transcripcional puede cumplir con los requisitos del producto farmacológico (DP) de circRNA con alta calidad.
Validación de la expresión in vitro de mCherry circRNA
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