el encapuchado del extremo 5' es una modificación esencial del mRNA. Los mRNAs con estructuras de cap, especialmente las estructuras Cap1, facilitan que los mRNAs evadan las respuestas inmunes innatas en vivo, lo que resulta en una traducción eficiente de proteínas.
El encapuchado enzimático (el método de dos pasos) es el método convencional de encapuchado de mRNA, similar al proceso de encapuchado en organismos eucariotas. Bajo la acción de una serie de enzimas, la 7-metilguanina (m7G) se une al extremo 5' del mRNA a través de un enlace trifosfato 5'-5' y sufre una modificación de metilación para formar la estructura de cap Cap 1 (m7GpppN).
Diagrama de la formación de la estructura de cap natural
El flujo de reacción de encapuchado enzimático es el siguiente:
El ADN plasmídico linealizado se utiliza como plantilla para la transcripción in vitro (IVT) en presencia de la polimerasa T7, y se forma un mRNA con una estructura de cap en el extremo 5' después de una purificación en un solo paso utilizando la enzima de encapuchado de viruela y la 2'-O-metiltransferasa.
Detalles de los Servicios
Servicio opcional |
Detalles del Servicio |
Plazo de Entrega (Día) |
tapado enzimático de ARNm |
Reacción de capping enzimática |
1 |
Optimización de la reacción de capping - opcional |
Diseño y optimización de componentes de reacción |
3~7 |
Nuestras características
- Diseño y optimización del componente de la reacción de capping
El componente de la reacción de capping está optimizado, y la producción del transcripto de mRNA aumenta considerablemente.
- Verificación de expresión in vitro
El mRNA con cap se transfiere a las células 293T, y se puede detectar la expresión de la proteína objetivo.
- Control Estricto de RNasa
A través de un control estricto de las RNasas en el entorno experimental y los consumibles, se previene eficazmente la degradación del mRNA.
Estudio de Caso
La plataforma de mRNA de Yaohai Bio-Pharma ha desarrollado un proceso perfecto de reacción de capping.
Para el mRNA de eGFP, un pre-producto de mRNA preparado mediante capping enzimático, se puede observar una señal de fluorescencia de eGFP (fluorescencia verde) a un nivel alto después de transfectar las células 293T durante 24 horas, lo cual se detecta por Western Blot (WB), demostrando que la proteína objetivo, proteína de fluorescencia verde mejorada (eGFP), puede expresarse eficientemente in vitro.
Expresión del mRNA de eGFP con capping enzimático en células 293T
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