La base de la encapsulación es el diseño y desarrollo del sistema de entrega. Un sistema de entrega bien diseñado permite que las moléculas de circRNA entren al cuerpo sin ser degradadas por enzimas de ARN y luego sean entregadas eficazmente al sitio objetivo, crucen la membrana celular y se liberen intracelularmente.
Las partículas lipídicas nanométricas (LNPs) son el mejor sistema de entrega disponible, con ventajas en encapsulación, expresión in vivo y seguridad in vivo en comparación con otros sistemas de entrega. Las LNPs con fragmentos de ácidos nucleicos se tragan fácilmente en las células y forman cuerpos intracelulares. Una vez que entran en la célula, el ambiente ácido del cuerpo intracelular protona y carga positivamente la cabeza del lípido ionizado, fusionándose así con la membrana interna del cuerpo intracelular y liberando el ácido nucleico objetivo en la célula para su acción.
El servicio de circRNA de Yaohai Bio-Pharma continúa mejorando y puede proporcionar el servicio de encapsulación de circRNA-LNP para optimizar los parámetros críticos del proceso relevante y mejorar la consistencia y reproducibilidad de la producción de medicamentos circRNA.
Proceso | Detalles del Servicio | Plazo de Entrega (Día) | Entregables |
encapsulación de circRNA-LNP | Pretratamiento de Materiales y Líquidos | 2 | producto farmacéutico circRNA-LNP (DP) |
Mezcla en Dispositivo Microfluido | |||
Filtración de Flujo Tangencial | 1 | ||
Filtración estéril | |||
control de calidad de circRNA-LNP | Eficiencia de encapsulación | 1 | Informe de prueba |
Tamaño de partícula e índice de polidispersidad | |||
Potencial Zeta |
Síntesis rápida, alta eficiencia en I+D y soluciones preoptimizadas;
La proporción de encapsulación puede alcanzar más del 90%;
El tamaño de las nanopartículas lipídicas puede controlarse cambiando la velocidad y la proporción de inyección del fluido;
los productos circRNA-LNP se validan mediante expresión celular in vitro y pueden expresar la proteína objetivo de manera eficiente.
Se preparan muestras de LNP-eGFP circRNA y se transfieren directamente diferentes dosis de ellas (1ug, 2ug y 4ug) en células 293T para verificar si pueden expresar la proteína objetivo. Después de 48 horas de transfección, se puede observar una señal fluorescente clara, y existe un efecto de escalado de dosis en la intensidad de fluorescencia.
Lipo-circ_eGFP, compuesto por liposomas y eGFP circRNA no encapsulado, se toma como control.