Con respecto a la producción masiva de mRNA, la transcripción in vitro (IVT) es un método más eficiente y maduro. La reacción IVT utiliza ADN plasmídico linealizado que contiene el promotor T7 como plantilla, y el mRNA se sintetiza con trifosfatos de nucleósidos (NTPs) como sustratos en presencia de la polimerasa T7 RNA.
La modificación de nucleótidos es un avance en la exploración del mRNA, donde las moléculas de mRNA no modificado son reconocidas por sensores de RNA intracelulares para activar la inmunidad innata. Por consideraciones de inmunogenicidad del mRNA in vivo y eficiencia de traducción, el proceso IVT generalmente emplea ciertos tipos de NTPs modificados, y los nucleótidos modificados comunes son pseudouridina (Ψ), N1-metil-pseudouridina (N1Ψ) y citosina-5-metil (5mC).
Proceso de Transcripción in Vitro de mRNA
Diagrama de la reacción de transcripción in vitro (IVT)
Detalles de los Servicios
Servicio opcional |
Detalles del Servicio |
Período de Entrega (día laborable) |
transcripción in vitro (IVT) |
IVT, Transcripción in vitro |
1 |
| Modificaciones de nucleótidos (Ψ/N1Ψ/5mC, etc.) |
| Eliminación de la plantilla de ADN (DNasa I) |
Optimización de condiciones IVT - opcional |
Diseño y optimización de componentes de la reacción de IVT |
2-5 |
Nuestras características
- Estrategias Diversificadas de Modificación de Nucleótidos
Mejora la estabilidad del mRNA y la expresión de proteínas in vivo.
- Diseño riguroso de pruebas y optimización
La preparación de fragmentos de mRNA de hasta 10kb puede lograrse.
Al optimizar las condiciones de reacción de IVT, la tasa de transcripción puede alcanzar hasta 1:200.
- Control Estricto de RNasa
Un control estricto de la RNasa mediante un entorno experimental y consumibles puede prevenir eficazmente la degradación del mRNA.
Estudio de Caso
El sistema de reacción IVT actual está optimizado aproximadamente para sistemas sintéticos con una longitud de unos 100 nt, no para mRNAs de longitud arbitraria. Cuanto más larga sea la secuencia de mRNA, más difícil será transcribirla y más propensa estará a la degradación.
Para preparar secuencias de mRNA personalizadas con una longitud de aproximadamente 10 kb, Yaohai Bio-Pharma ha logrado preparar muestras de alta calidad con una alta relación de transcripción de 1:135 y obtener 135 μg de productos de mRNA purificados inicialmente después de que 1 μg de plásmido linealizado fue transcrito in vitro a través de un diseño experimental riguroso, optimización continua de las condiciones de reacción y un estricto control de la RNasa.
Identificación de mRNA (Electroforesis en Gel de Agarosa)
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