Yaohai Bio-Pharma prepara circRNA basado en el sistema PIE (alineación de exones e intrones), lo que se basa en la función autosplicable de los intrones tipo I para lograr la ciclización del ARN. La estructura PIE se diseña utilizando el gen T4 td o el gen precursor de tRNA de origen pez, y el ordenamiento es el siguiente:
El intrón de ARN y el fragmento de exón de apoyo se dividen en dos partes (extremo 5' y extremo 3'), donde la secuencia del extremo 5' se transfiere al final de la secuencia objetivo, la secuencia del extremo 3' se inserta frente a la secuencia objetivo, y la secuencia del gen objetivo se inserta en el medio.
Bajo la catalización del GTP, la estructura PIE conduce a la ciclización de las secuencias distintas de los intrones. Combinado con una estrategia razonable de mejora de la tasa de ciclización, Yaohai Bio-Pharma puede lograr la ciclización de secuencias de hasta 4 kb con una tasa de ciclización superior al 80%.
Figura 1. Circulación in vitro de circRNA basada en el sistema PIE
Detalles de los Servicios
| Proceso |
Servicio opcional |
Detalles del Servicio |
Período de Entrega (día laborable) |
| diseño y optimización de secuencias de circRNA |
Diseño y optimización de secuencias codificantes |
Alineamiento de secuencias CDS
Optimización de codones CDS
|
1 |
| Diseño y optimización de secuencias no codificantes |
Diseño y optimización de secuencias de intrón y exón
Diseño y optimización de secuencias de brazo homólogo
Diseño y optimización de secuencias espaciadoras
|
1-2 |
Estrategias Comunes para el Diseño de Secuencia de mRNA
| Componentes de CircRNA |
Funciones Biológicas |
Estrategias de optimización |
| Secuencias de intrón y exón de dos terminales |
Autosplicado catalizado por GTP para la ciclización de secuencias fuera del intrón. |
Diseñado según el gen T4 td o el gen precursor de tRNA de aceite de pescado. |
| Codificación |
IRES |
Sitio de reconocimiento ribosómico interno que regula la traducción de circRNA. |
Selección de secuencias de sitios de entrada ribosómica interna (IRES) de diferentes fuentes virales, por ejemplo, fuentes EMCV, CVB3. |
| CDS |
Regiones codificadoras de proteínas, secuencias que codifican antígenos, anticuerpos u otras proteínas funcionales. |
La optimización de codones aumenta el nivel de traducción; ciertos codones no óptimos pueden desempeñar un papel en la plegadura de las proteínas. |
| No codificante |
Secuencias no codificantes |
Dirigir microRNAs (miRNAs) o proteínas para ejercer regulación genética o de proteínas. |
Dirigir sitios de unión específicos para miRNAs o proteínas puede repetir las secuencias del sitio de unión. |
Nuestras características
- Sistema Optimizado de Ciclización PIE combinado con estrategias de optimización razonables para lograr una tasa de ciclización superior al 80%;
- Colaboración con el Equipo de Optimización de CDS de vanguardia y un equipo de algoritmos de IA profesional para completar la optimización de los codones de la región CDS;
- Un proceso maduro y perfecto de circRNA se puede lograr con alta eficiencia de ciclización, alta estabilidad y alta eficiencia de traducción.
Estudio de Caso
Yaohai Bio-Pharma lanzó el producto de control de proteína de fluorescencia verde mejorada (eGFP) circRNA, que se basa en el sistema PIE para lograr la ciclización del ARN.
Usando un reagente de transfección convencional, el eGFP circRNA se transfiere a las células 293T, y se puede detectar la señal de fluorescencia de eGFP (verde) después de 24h, la cual se intensificará después de 48h. La señal de fluorescencia aún se puede detectar el séptimo día y el decimocuarto día después de la transfección.
Validación de la expresión in vitro del eGFP circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
