Ensayos de Potencia Basados en Células
La Importancia del Ensayo de Potencia de mRNA
Con el desarrollo rápido de vacunas y terapias de mRNA, se necesita un panel específico de métodos de análisis para probar la potencia (definiendo su actividad biológica), lo que implica la eficiencia de traducción del mRNA. Estos métodos suelen basarse en la transfección celular y ensayos funcionales de la proteína objetivo.
Yaohai Bio-Pharma ofrece ensayos de potencia basados en células para sustancias farmacéuticas de mRNA o productos LNP, incluyendo transfección celular (células 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, etc.) y ensayos de ELISA o Western Blotting (WB).
Requisitos Regulatorios para los Ensayos de Potencia
De acuerdo con las consideraciones regulatorias de la OMS, "La potencia de cada lote de la vacuna final debe determinarse utilizando un método funcional cuantitativo y validado adecuado. Los ensayos potenciales in vitro para la potencia pueden incluir sistemas de transfección basados en células u otros ensayos sin células". Y la USP recomendó un "ensayo basado en células" para probar la potencia del ARNm, es decir, la expresión de la proteína objetivo.
Método Analítico
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Análisis
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Métodos
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Ensayos de Potencia
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Transfección basada en células e identificación de la proteína objetivo:
células 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, etc.
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Procedimiento
Paso 1. Transfección basada en células con ARNm o ARNm-LNP
Las células se cultivan y se transfieren con ARNm o ARNm-LNP. En detalle, el ARNm se transfiere después de mezclarse con un reagente de transfección, mientras que el ARNm-LNP se transfiere directamente a las células. Después de 24-48 horas, se aclara el sobrenadante que contiene la proteína expresada mediante centrifugación.
Paso 2. Ensayos funcionales de la proteína objetivo
Realizar ensayos de ELISA o WB para evaluar el enlace funcional de las proteínas objetivo.
Estudio de Caso
Ensayos de Potencia Basados en Células de Muestras de mRNA
Yaohai-BioPharma ha desarrollado un método de ensayo de potencia basado en células para mRNA, que incluye cultivo celular, transfección celular y ensayos funcionales de proteínas. Transfectamos mRNA de eGFP, mRNA de mCherry, mRNA de luciferasa, mRNA de proteína de pico en células 293T, y detectamos la proteína objetivo a través de señales de fluorescencia, lumínica o coloreada, WB, ELISA.
Ensayos de Potencia Basados en Células de Productos de mRNA por Yaohai Bio-Pharma
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