V procesu přípravy in vitro transkripce (IVT) mRNA je vyžadována linearizovaná plazmidová DNA jako transkripční templát pro IVT pomocí T7 RNA polymerázy. Vysoce kvalitní plazmidová DNA je klíčová pro in vitro transkripci.
Na základě servisní platformy pro přípravu zralého plazmidu může Yaohai Bio-Pharma nabídnout službu přípravy linearizované plazmidové DNA vysoké čistoty a vysokého standardu pro dosažení účinné transkripce IVT.
Podrobnosti o službách
| Proces | Volitelná služba | Podrobnosti služby | Dodací lhůta (pracovní den) |
| Příprava cirkulárního plazmidu | Genová syntéza | Genová syntéza (třetí strana) | 7-10 |
| Amplifikace plazmidu | Amplifikace plazmidu | 2 |
| Extrakce plazmidu |
| Příprava linearizovaného plazmidu | Linearizace a čištění plazmidu | Linearizace plazmidu | 1 |
| Linearizace Purifikace DNA |
| Kontrola kvality plazmidové DNA | Koncentrační čistota | Ultrafialová (UV) spektrofotometrie | 1-2 |
| Plazmidová konformace | Elektroforéza na agarózovém gelu (AGE) |
| Kapilární elektroforéza (CE) – volitelná |
| Identifikace plazmidu | Identifikace restrikčního enzymu/ AGE |
Naše funkce
- Volně střižená šablona Plazmid
Flexibilní výběr metod linearizace
Optimalizace metod extrakce a purifikace DNA pro dosažení vysoké míry výtěžnosti.
Přísné standardy řízení procesu s mírou superhelikální konformace vzorků plazmidu pro výzkum přes 80 %.
Vysoce standardní a vysoce účinná příprava plazmidu a služby kontroly kvality pro splnění experimentálních potřeb.
Případová studie
Vezmeme-li jako příklad produkt mRNA_luciferázy z katalogu Yaohai Bio-Pharma, vzorek plazmidu transkripčního templátu (třída pro výzkum) má superhelikální poměr více než 90 %, poměr linearizace blízký 100 % a následný transkripční poměr až 1:200 ( linearizovaná plazmidová DNA:mRNA).
mRNA_luciferáza získaná přípravou linearizovaného plazmidu jako templátu se transfekuje do buněk 293T a reakční aktivita enzym-substrát se hodnotí 24 hodin po transfekci.
Lze detekovat zřejmý signál silné luciferázové aktivity, tj. luciferázový protein je exprimován účinně, což naznačuje, že čistota transkripčního templátu může plně uspokojit požadavek na vysoce kvalitní přípravu mRNA.
Test supercoiled plasmid Ratio
Validace exprese mRNA luciferázy in vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
