Příprava CircRNA vyžaduje lineární RNA jako prekurzorový materiál (prekurzor RNA) pro cyklizaci, kde se prekurzor RNA obvykle připravuje pomocí linearizované plazmidové DNA jako transkripčního templátu a transkribuje se in vitro pomocí T7 RNA polymerázy.
Vysoce kvalitní plazmidová DNA je nezbytná pro in vitro transkripci (IVT). Na základě servisní platformy pro přípravu zralého plazmidu může Yaohai Bio-Pharma poskytnout službu přípravy vysoce čisté a standardní linearizované plazmidové DNA (pDNA), aby byla zajištěna integrita produktů IVT.
Podrobnosti o službách
| Proces |
Volitelná služba |
Podrobnosti služby |
Dodací lhůta (pracovní den) |
| Příprava cirkulárního plazmidu |
Genová syntéza |
Genová syntéza (třetí strana) |
7-10 |
| Amplifikace plazmidu |
Amplifikace plazmidu |
2 |
| Extrakce plazmidu |
| Příprava linearizovaného plazmidu |
Linearizace a čištění plazmidu |
Linearizace plazmidu |
1 |
| Linearizace Purifikace DNA |
| Kontrola kvality plazmidové DNA |
Koncentrační čistota |
Ultrafialová (UV) spektrofotometrie |
1-2 |
| Plazmidová konformace |
Elektroforéza na agarózovém gelu (AGE) |
| Kapilární elektroforéza (CE) – volitelná |
| Identifikace plazmidu |
Identifikace restrikčního enzymu/ AGE |
Naše funkce
- Volně střižená šablona Plazmid
Flexibilní výběr metod linearizace
Optimalizace metod extrakce a purifikace DNA pro dosažení vysoké míry výtěžnosti.
Přísné standardy řízení procesu s mírou superhelikální konformace vzorků plazmidu pro výzkum přes 80 %.
Vysoce standardní a vysoce účinná příprava plazmidu a služby kontroly kvality pro splnění experimentálních potřeb.
Případová studie
Vezmeme-li jako příklad produkt Yaohai Bio-Pharma mCherry circRNA, poměr superspirálů u vzorků plazmidu transkripčního templátu (výzkumný stupeň) je více než 70 %, s mírou linearizace blízkou 100 %.
mCherry circRNA se připraví s linearizovaným plazmidem jako templátem a transfekuje se do 293T buněk. Vysoká hladina fluorescenční exprese (červená fluorescence) je detekována po 24 hodinách transfekce, která bude zesílena po 48 hodinách a může být stále detekována 7. den a 14. den po transfekci.
Protein mCherry je stabilně a účinně exprimován a čistota transkripčního templátu může splnit požadavek na léčivý produkt circRNA (DP) s vysokou kvalitou.
In vitro ověření exprese mCherry circRNA
CS
EN
AR
HR
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
