Integrita mRNA
Význam analýzy integrity mRNA
mRNA jsou uznávány pro svou inherentní nestabilitu a jsou náchylné k fragmentaci v přítomnosti vnějších faktorů, zejména během in vitro transkripce (IVT) a purifikačních procesů, kde všudypřítomné nukleázy představují výzvu. Hodnocení integrity mRNA je zásadní v následném vývoji léků na bázi mRNA, což zajišťuje jak bezpečnost, tak dostupnost produktu.
Yaohai-BioPharma poskytuje komplexní služby testování integrity mRNA pomocí metod, jako je elektroforéza na agarózovém gelu (AGE), kapilární elektroforéza (CEG) a vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC), dodržující přísné standardy kvality pro výzkum i klinické studie.
Regulační požadavky na integritu mRNA
Podle regulačních úvah WHO je „integrita struktury mRNA považována za kritický atribut kvality pro uvolňování mRNA. Je tedy potřeba kontrola integrity mRNA, procento intaktní mRNA, procento fragmentů mRNA a tak dále.
Analytická metoda
Analýza | Metody |
integrita mRNA | AGE, Agarózagelektroforéza |
CGE,Kapilární elektroforéza |
CGE-LIF, kapilární gelová elektroforéza se světlem indukovanou fluorescenční detekcí |
Integrita mRNA elektroforézou na agarózovém gelu
Elektroforéza na agarózovém gelu je široce používaná technika pro hodnocení integrity celkové RNA. To zahrnuje nanesení vzorku RNA na denaturační agarózový gel, obarvený buď ethidium bromidem nebo SYBR Green. Denaturační gel složený z agarózy usnadňuje separaci RNA na základě velikosti při použití elektrického proudu. Jak záporně nabitá RNA migruje směrem ke kladnému konci gelu, menší fragmenty se pohybují rychleji, což vede k třídění molekul RNA na základě velikosti.
Integrita mRNA kapilární gelovou elektroforézou
Kapilární gelová elektroforéza (CGE) představuje analytický přístup s vysokým rozlišením, který je klíčový pro měření integrity molekul RNA podle délky. Toto hodnocení má význam pro zajištění kvality, pochopení účinnosti a optimalizaci výrobních procesů. Podobně jako elektroforéza na agarózovém gelu využívá CGE elektrický proud k segregaci fragmentů RNA na základě jejich náboje a velikosti. V CGE je kapilára naplněna separační gelovou matricí napuštěnou fluorescenčním barvivem. Pohyb RNA podél kapiláry je závislý na její velikosti a detekce se dosahuje pomocí ultrafialových (UV) nebo světlem indukovaných fluorescenčních detektorů (LIF).
EN
