Yaohai Bio-Pharma připravuje circRNA založenou na systému PIE (zarovnání exonů a intronů), který se spoléhá na samosestřihovou funkci intronů typu I k dosažení cyklizace RNA. Struktura PIE je navržena pomocí genu T4 td nebo prekurzorového genu rybí tRNA a uspořádání je následující:
RNA intron a podpůrný exonový fragment jsou rozděleny do dvou částí (5' terminální a 3' terminální), kde 5' terminální sekvence je přenesena na konec cílové sekvence, 3' terminální sekvence je vložena do přední části cílová sekvence a sekvence cílového genu je vložena doprostřed.
Za katalýzy GTP vede struktura PIE k cyklizaci sekvencí jiných než introny. V kombinaci s rozumnou strategií vylepšení míry cyklizace může Yaohai Bio-Pharma dosáhnout cyklizace sekvencí až 4 kb s mírou cyklizace vyšší než 80 %.
Obrázek 1. In vitro cirkulace circRNA na základě PIE systému
Podrobnosti o službách
| Proces | Volitelná služba | Podrobnosti služby | Dodací lhůta (pracovní den) |
| Návrh a optimalizace sekvence circRNA | Návrh a optimalizace kódovacích sekvencí | Zarovnání sekvencí CDS Optimalizace kodonů CDS | 1 |
| Návrh a optimalizace nekódujících sekvencí | Návrh a optimalizace sekvencí intronů a exonů Návrh a optimalizace homologní sekvence ramen Návrh a optimalizace sekvence distančních vložek | 1-2 |
Společné strategie pro návrh sekvencí mRNA
| Komponenty CircRNA | Biologické funkce | Optimalizační strategie |
| Dvoukoncové intronové a exonové sekvence | GTP-katalyzované sestřihování intronu pro cyklizaci sekvencí mimo intron. | Navrženo podle genu T4 td nebo prekurzorového genu tRNA rybího oleje. |
| Kódování | IRES | Vnitřní rozpoznávací místo ribozomu, které reguluje translaci circRNA. | Screening sekvencí vnitřního místa vstupu ribozomu (IRES) z různých virových zdrojů, např. EMCV, CVB3 zdrojů. |
| CDS | Oblasti kódující protein, sekvence kódující antigeny, protilátky nebo jiné funkční proteiny. | Optimalizace kodonů zvyšuje úroveň translace; některé neoptimální kodony mohou hrát roli při skládání proteinů. |
| Nekódování | Nekódující sekvence | Zacilte miRNA nebo proteiny, abyste uplatňovali genovou nebo proteinovou regulaci. | Cílení na specifická vazebná místa pro miRNA nebo proteiny může opakovat sekvence vazebného místa. |
Naše funkce
- Optimalizovaný systém cyklizace PIE Kombinace s rozumnými optimalizačními strategiemi pro dosažení míry cyklizace vyšší než 80 %;
- Špičkový tým pro optimalizaci CDS Spolupráce s profesionálním týmem pro algoritmy AI na dokončení optimalizace kodonů oblasti CDS;
- Zralé a dokonalé procesní circRNA lze dosáhnout s vysokou účinností cyklizace, vysokou stabilitou a vysokou účinností translace.
Případová studie
Společnost Yaohai Bio-Pharma uvedla na trh kontrolní produkt circRNA se zvýšeným zeleným fluorescenčním proteinem (eGFP), který je založen na systému PIE k dosažení cyklizace RNA.
Pomocí konvenčního transfekčního činidla je eGFP circRNA transfekována do 293T buněk a eGFP (zelený) fluorescenční signál může být detekován po 24 hodinách, který bude zesílen po 48 hodinách. Fluorescenční signál lze stále detekovat 7. den a 14. den po transfekce.
In vitro validace exprese eGFP circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
