LNP Lipid Složení Identifikujte a množství
Význam analýzy složení lipidů LNP
Lipidové nanočástice (LNP), obsahující kationtový lipid, cholesterol, fosfolipid a PEG-konjugovaný lipid, slouží jako prominentní dodávací systémy pro léčivé produkty mRNA. Stabilita a dvouvrstvá fluidita LNP závisí na vlastnostech a obsahu různých lipidů použitých ve formulačním systému. Složení lipidů je velmi důležité pro to, jak dobře LNP dodávají léky.
Yaohai-BioPharma poskytuje řešení pro identifikaci a kvantifikaci lipidového složení mRNA-LNP pomocí metody vysokoúčinné kapalinové chromatografie s detekcí nabitého aerosolu (HPLC-CAD).
Regulační požadavky na složení lipidů
Podle regulačních úvah WHO: „Konečné složení vakcíny, včetně lipidů, by mělo být popsáno spolu s množstvím složek v každé prezentaci.
Analytická metoda
Analýza |
Metody |
Lipidové složení |
HPLC v kombinaci s Corona Charged Aerosol Detector (CAD) |
Postup
Krok 1. Příprava vzorku lipidů
Výběr ředidla má zásadní význam pro analýzu lipidových složek v léčivých produktech mRNA-LNP. Ředidlo by mělo účinně rozpouštět každou lipidovou složku a narušovat jakékoli interakce mezi lipidy a zapouzdřenou mRNA. Potenciální ředidla zahrnují ethanol, ethanol/dimethylsulfoxid (DMSO), ethanol/formamid, ethanol/triethylaminacetát a další.
Krok 2. HPLC-CAD
Kapalinová chromatografie na reverzní fázi (RP-HPLC) spárovaná s nabitým aerosolovým detektorem (CAD) byla začleněna do testování složení lipidů LNP. Vzhledem k tomu, že lipidy postrádají chromofory a neabsorbují ultrafialové (UV) záření bez derivatizace, je těkání typicky náročné. CAD, protože je citlivější, dokáže rozeznat širší spektrum obsahu lipidů. Dříve byla formulována ultravysokoúčinná kapalinová chromatografie (UHPLC) spojená s metodou nabitého aerosolového detektoru (CAD) a použita při analýze lipidů pro studie LNP s malou interferující RNA (siRNA).
Krok 3. Analýza dat
Množství každého lipidu ve vzorku zahrnovalo výpočty odvozené ze standardní křivky vynásobené faktorem ředění. Tento proces poskytl obsah lipidů pro každou složku ve vzorku mRNA-LNP.
Případ analýzy složení lipidů LNP s HPLC-CAD
Yaohai-BioPharma na základě HPLC-CAD vyvinula robustní metodu pro analýzu lipidových složek mRNA-LNP. Tato metoda byla ověřena jako lineární, opakovatelná, přesná, přesná a specifická pro formulace LNP, což by mohlo podporovat vývoj procesu, vývoj formulací, testování stability a uvolňování mRNA-LNP.
Chromatografický profil 4 lipidů metodou Yaohai-BioPharma HPLC-CAD
Linearita HPLC-CAD metody Yaohai-BioPharma (R2＞0.99)
EN
