Význam testu účinnosti mRNA
S rychlým vývojem mRNA vakcín a terapeutik je zapotřebí specifický panel analytických metod pro testování účinnosti (definující jejich biologickou aktivitu), zahrnující translační účinnost mRNA. Tyto způsoby jsou typicky založeny na buněčné transfekci a funkčních testech cílového proteinu.
Yaohai Bio-Pharma nabízí testy účinnosti na bázi buněk pro mRNA léčivé látky nebo produkty LNP, včetně buněčné transfekce (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, buňky Raw264.7 atd.) a testy ELISA nebo Western blotting (WB).
Regulační požadavky na testy účinnosti
Podle regulačních úvah WHO: „Účinnost každé šarže finální vakcíny by měla být stanovena pomocí vhodně kvantitativních a ověřených funkčních metod. Potenciální testy účinnosti in vitro mohou zahrnovat transfekční systémy na bázi buněk nebo testy bez buněk. A USP doporučil „buněčný test“ pro testování účinnosti mRNA, tj. exprese cílového proteinu.
Postup
Krok 1. Buněčná transfekce mRNA nebo mRNA-LNP
Buňky jsou kultivovány a transfekovány mRNA nebo mRNA-LNP. Podrobně, mRNA je transfekována po smíchání s transfekčním činidlem, zatímco mRNA-LNP je přímo transfekována do buněk. Po 24-48 hodinách se supernatant obsahující exprimovaný protein vyčeří centrifugací.
Krok 2. Funkční testy cílového proteinu
Proveďte testy ELISA nebo WB pro posouzení funkční vazby cílových proteinů.
Případová studie
Buněčné testy účinnosti vzorků mRNA
Yaohai-BioPharma vyvinula buněčnou metodu testu účinnosti pro mRNA, zahrnující buněčnou kulturu, buněčnou transfekci a funkční testy proteinů. Transfekovali jsme eGFP mRNA, mCherry mRNA, luciferázovou mRNA, spike protein mRNA do 293T buněk a detekovali cílový protein pomocí fluorescence, luminiscenčního nebo barevného signálu, WB, ELISA.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
