Pokud jde o dávkovou přípravu prekurzorů RNA, běžně používanou metodou je in vitro transkripce (IVT). IVT reakce využívá linearizovanou plazmidovou DNA obsahující promotor T7 jako templát a syntetizuje prekurzor RNA s nukleosidtrifosfáty (NTP) jako substrátem v přítomnosti T7 RNA polymerázy.
In vitro cyklizační metody zahrnují chemickou ligaci, enzymatickou ligaci a metodu permutovaného intronu-exonu (PIE). Chemická ligace a enzymatická ligace jsou vhodné pro cyklizaci kratších RNA. Když je fragment větší než 100 nt, rychlost cyklizace se výrazně sníží. Naproti tomu nukleázová metoda založená na PIE systému může dosáhnout cyklizace sekvencí o velikosti 8 kb.
Za katalýzy guanosintrifosfátu (GTP) podléhá PIE struktura cyklizaci extra-intronových sekvencí. V kombinaci s rozumnou strategií pro zvýšení rychlosti cyklizace může Yaohai Bio-Pharma dosáhnout cyklizace až 4 kb sekvencí s účinností cyklizace více než 80 %.
In vitro cyklizační reakce RNA probíhá následovně:
Prekurzor RNA je syntetizován in vitro transkripcí a PIE složka dokončuje samosestřih za katalýzy GTP za vzniku circRNA.
Podrobnosti o službách
| Proces | Podrobnosti služby | Dodací lhůta (pracovní den) |
| In vitro transkripce a cirkulace | Potvrzení reakčního systému | 1-2 |
| In vitro transkripční a cyklizační reakce |
| Štěpení RNázy R |
| Optimalizace reakce | Složení reakce, optimalizace času | 2-5 |
Naše funkce
- Návrh a optimalizace přísných testů
Lze dosáhnout až 4 kb cyklizace RNA.
- Vysoká účinnost cyklizace
Pomocí racionální strategie optimalizace sekvence lze dosáhnout míry cyklizace vyšší než 80 %.
Prostřednictvím přísné kontroly RNáz v experimentálním prostředí a spotřebního materiálu je účinně zabráněno degradaci RNA.
Případová studie
In vitro cyklizace a obohacení circRNA
Na základě systému PIE společnost Yaohai Bio-Pharma optimalizovala sekvenci circRNA s mírou cyklizace více než 80 % pomocí elektroforézy na agarózovém gelu (AGE). Výsledky elektroforézy na E-gelu s použitím RNázy R k obohacení circRNA ukazují, že lineární prekurzor RNA je štěpen a po další purifikaci může být odstraněna většina nasekané circRNA. Čistící roztok byl vyvinut společností Yaohai Bio-Pharma.
In vitro cirkulace a obohacení circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
