Zakrytí 5'-konce je podstatnou modifikací mRNA. mRNA se strukturou čepice, zejména struktury Cap1, usnadňují mRNA vyhýbat se vrozeným imunitním reakcím in vivo, což vede k účinné translaci proteinů.
Enzymatické zavíčkování (dvoukroková metoda) je konvenční metoda zavíčkování mRNA, podobná procesu zavíčkování v eukaryotických organismech. Působením řady enzymů je 7-methylguanin (m7G) spojen s 5'-koncem mRNA prostřednictvím 5'-5' trifosfátové vazby a podléhá methylační modifikaci za vzniku čepicové struktury Cap 1 (m7GpppN).
Schéma tvorby přirozené struktury čepice
Tok enzymatické uzavírací reakce je následující:
Linearizovaná plazmidová DNA se používá jako templát pro in vitro transkripci (IVT) v přítomnosti T7 polymerázy a mRNA se strukturou 5' end-cap se vytvoří po jednokrokové purifikaci pomocí enzymu capping vaccinia a 2'-O -methyltransferáza.
Podrobnosti o službách
Volitelná služba |
Podrobnosti služby |
Dodací lhůta (den) |
enzymatické zakončení mRNA |
Enzymatická uzavírací reakce |
1 |
Optimalizace reakce zakrytí – volitelná |
Návrh a optimalizace reakčních komponent |
3 7 ~ |
Naše funkce
- Návrh a optimalizace komponenty uzavírací reakce
Složka zavíčkovací reakce je optimalizována a produkce mRNA transkriptu je značně zvýšena.
Uzavřená mRNA je transfekována do 293T buněk a může být detekována exprese cílového proteinu.
Prostřednictvím přísné kontroly experimentálního prostředí RNaseson a spotřebního materiálu je účinně zabráněno degradaci mRNA.
Případová studie
Platforma mRNA společnosti Yaohai Bio-Pharma vytvořila dokonalý proces zavíčkování.
U eGFP mRNA, preproduktu mRNA připraveného enzymatickým cappingem, lze po transfekci buněk 293T po dobu 24 hodin pozorovat fluorescenční signál eGFP (zelená fluorescence), který je detekován metodou Western Blot (WB), což dokazuje, že Zelený fluorescenční protein zesílený cílovým proteinem (eGFP) může být účinně exprimován in vitro.
Exprese enzymatické eGFP mRNA s čepičkou v buňce 293T
CS
EN
AR
HR
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
