V procesu přípravy in vitro transkripcí (IVT) mRNA je vyžadován linearizovaný plazmidový DNA jako transkripční šablona pro IVT s pomocí polymerázy T7 RNA. Kvalitní plazmidové DNA je klíčová pro in vitro transkripci.
Na základě dospělé platformy pro služby přípravy plazmidů může Yaohai Bio-Pharma nabídnout službu přípravy linearizovaného plazmidového DNA s vysokou čistotou a vysokým standardem pro efektivní transkripci IVT.
Detaily služeb
| Proces |
Volitelná služba |
Detaily služby |
Doba dodání (pracovní den) |
| Příprava kruhového plazmidu |
Syntéza genu |
Syntéza genu (Třetí strana) |
7-10 |
| Amplifikace plazmidu |
Amplifikace plazmidu |
2 |
| Extrakce plazmidu |
| Příprava linearizovaného plazmidu |
Linearizace a čištění plazmidu |
Linearizace plazmidu |
1 |
| Očištění linearizované DNA |
| Kontrola kvality plazmidové DNA |
Koncentrace a čistota |
Ultravioleťová (UV) spektrofotometrie |
1-2 |
| Konformace plazmidu |
Elektroforeze v agárovém geлу (AGE) |
| Kapilární elektroforeze (CE) - Volitelné |
| Identifikace plazmidu |
Identifikace restrikčních enzymů / AGE |
Naše funkce
- Šablonový plazmid s volbou
Pružné vybrání metod linearizace
Optimalizace metod extrakce a očišťování DNA pro dosažení vysoké úspěšnosti izolace.
Přísné standardy řízení procesu, s mírou superhelikální konformace plazmidních vzorků pro výzkum přes 80 %.
- Zrálá platformová procedura
Vysoké standardy a efektivní služby přípravy plazmidů a kontroly kvality pro splnění experimentálních potřeb.
Případová studie
Jako příklad vezmeme produkční mRNA_luciferase z katalogu Yaohai Bio-Pharma. Transkripční šablonový plazmidový vzorek (výzkumná úroveň) má míru superhelikální konformace přes 90 %, míru linearizace blízkou 100 % a následnou transkripční míru až 1:200 (linearizovaná DNA plazmidiu: mRNA).
MRNA_luciferase získaná pomocí linearizovaného plazmidu jako šablony je transfekována do buněk 293T a aktivita enzym-substrátové reakce je posuzována 24 hodin po transfekci.
Je možné detekovat jasný silný signál luciferásové aktivity, tj. protein luciferázy je vyjadřován efektivně, což naznačuje, že čistota transkripční šablony plně vyhovuje požadavkům na přípravu kvalitní mRNA.
Asociace supercoilového plazmidu
Validace expresivity mRNA luciferázy in vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
