zakončení 5'-koncové části je nezbytnou modifikací mRNA. mRNA s kapovými strukturami, zejména s Cap1 strukturami, usnadňují mRNA únik před imunitními odpověďmi in vivo, což vede k efektivní translaci bílkovin.
Enzymatické zakončení (dvoukroková metoda) je konvenční metodou zakončování mRNA, podobná procesu zakončování u eukaryotických organismů. Za působení řady enzymů je 7-methylguanin (m7G) spojen s 5'-koncovou částí mRNA prostřednictvím 5'-5' trifosfátové vazby a podrobí se methylací modifikaci, která tvoří kapovou strukturu Cap 1 (m7GpppN).
Schéma tvorby přirozené kapové struktury
Průběh enzymatického zakončování je následující:
Lineární DNA plazmidu je použito jako šablona pro in vitro transkripci (IVT) v přítomnosti polymerázy T7 a mRNA s kapovou strukturou na 5' konci je tvořena po jednopásové čištění pomocí enzymu vaccinia capping enzyme a 2'-O-methyltransferázy.
Detaily služeb
Volitelná služba |
Detaily služby |
Doba dodání (den) |
enzymatické uzavírání mRNA |
Enzymatická kapačná reakce |
1 |
Optimalizace kapačné reakce - volitelné |
Návrh a optimalizace složek reakce |
3~7 |
Naše funkce
- Návrh a optimalizace složek kapačné reakce
Složka kapačné reakce byla optimalizována a produkce mRNA transkriptu byla významně zvýšena.
- In vitro ověření expresivity
Kapačná mRNA je transfikována do buněk 293T a detekce expresivity cílového proteiny je možná.
Díky přísné kontrole RNase v experimentálním prostředí a spotřebičích je účinně zabráněno degradaci mRNA.
Případová studie
Platforma mRNA společnosti Yaohai Bio-Pharma vyvinula dokonalý proces zakončovací reakce.
Pro enzymaticky zakončenou mRNA eGFP lze pozorovat intenzivní signál zelené fluorescencie (zelená fluorescenční emise) 24 hodin po transfekci buněk 293T, což je detekováno pomocí Western Blot (WB), čímž se ukazuje, že cílový protein, zvýšený zelený fluorescenční protein (eGFP), může být efektivně expresován in vitro.
Expresce enzymaticky zakončené mRNA eGFP v buňkách 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
