Ve srovnání s dvoufázovým enzymatickým zakončením může jednofázová metoda současného tranzkripčního zakončení významně zjednodušit proces. Tato metoda je orientována na výsledek a spočívá v přidání kapových analogů do reakce in vitro tranzkripce (IVT). Kapové analogy lze uvést na začátku tranzkripce a po jejím dokončení se získá mRNA s kapovou strukturou. Současné třetí generace kapových analogů mohou zabránit opačnému zakončení a přímo přidat Cap 1 strukturu k produkту tranzkripce.
Z hlediska imunogennosti mRNA v vivo a účinnosti překladu často proces IVT používá určité druhy modifikovaných NTPs, běžné modifikované nukleotidy jsou pseudouracil (Ψ), N1-methyl-pseudouracil (N1Ψ) a 5-methylcytosine (5mC).
Obrázek: Schéma ko-transkripční reakce a zakončení mRNA
Detaily služby
Služba |
Detaily služby |
Doba dodání (pracovní den) |
Ko-transkripční zakončení |
Reakce in vitro na transkripci (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Modifikace nukleotidů (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Odstranění DNA šablony (DNase I) |
Optimalizace podmínek IVT - volitelné |
Návrh a optimalizace složek reakce |
3-7 |
Naše funkce
- Rozmanité strategie úpravy nukleotidů
Několik volitelných strategií úpravy nukleotidů může zlepšit expresi bílkovin.
- Optimalizovaný reakční systém
Dosáhněte vysokého poměru transkripcе a vysoké účinnosti zakončení.
- Stabilní proces zakončení
Dosáhněte míry zakončení více než 95 %.
Efektivně předejte degradaci mRNA přísnou kontrolou RNase ve výzkumném prostředí a spotřebičích.
Případová studie
Yaohai Bio-Pharma vybudovala dospělou platformu pro současnou transkripční zakončovací proces, která používá čisté kapové analogy pro přímé přidání struktury Cap1 a zároveň se vyhýbá opačnému zakončení. Po standardizovaném předzpracování vzorků a detekci kapilární elektroforezí (CE) může být míra zakončení mRNA zvýšené zelené fluorescenční bílkoviny (eGFP) více než 95 %.
účinnost zakončení mRNA eGFP více než 95 %
MRNA eGFP a mRNA mCherry připravené pomocí kotranskriptionálního zakončování jsou transfikovány do buněk 293T, respektive, a po 48 hodinách je pozorován silný fluorescenční signál, což naznačuje, že mRNA je efektivně vyjádřena v buňkách 293T.
Výraz mRNA eGFP a mRNA mCherry v buňkách 293T
CS
EN
AR
HR
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
