Základem encapsulace je návrh a vývoj systému dodávky. Dobře navržený systém dodávky umožňuje molekulám circRNA vstoupit do těla bez rozkladu enzymy RNA a poté být účinně dodány na cílové místo, překročit buněčnou membránу a uvolnit se vnitrobuněčně.
Lipidové nanoparticle (LNPs) jsou nejlepším dostupným systémem pro dodávku, s výhodami v oblasti inkapsulace, expresních schopností in vivo a bezpečnosti in vivo ve srovnání s jinými systémy pro dodávku. LNPs s úlomky nukleové kyseliny se snadno začleňují do buněk a tvoří intracelulární struktury. Jakmile vstoupí do buňky, kyselá prostředí intracelulární struktury protonuje a pozitivně nabíjí hlavu ionizovaného tuku, čímž se slucuje s vnitřní membránou intracelulární struktury a uvolňuje cílovou nukleovou kyselinu do buňky pro její působení.
Služba circRNA od Yaohai Bio-Pharma se neustále zdokonaluje a může poskytnout službu inkapsulace circRNA-LNP, která optimalizuje relevantní kritické parametry procesu a zvyšuje konzistenci a opakovatelnost produkce léků circRNA.
Proces | Detaily služby | Doba dodání (den) | Dodávané výsledky |
Encapsulation circRNA-LNP | Předzpracování materiálu a kapaliny | 2 | circRNA-LNP lékový produkt (DP) |
Míchání v mikrofluidickém zařízení | |||
Tangenciální toková filtrace | 1 | ||
Sterilizující filtrace | |||
Kontrola kvality circRNA-LNP | Účinnost encapsulace | 1 | Zkušební zpráva |
Velikost částic a index polydisperznosti | |||
Zeta potenciál |
Rychlá syntéza, vysoká účinnost R&D a předem optimalizovaná řešení;
Poměr encapsulace může dosáhnout více než 90%;
Velikost lipidních nanoparticlí lze řídit změnou rychlosti a poměru vstřikování tekutiny;
Produkty circRNA-LNP jsou ověřeny in vitro expresí buněčnou a mohou efektivně vyjadřovat cílový bílek.
Vzorky LNP-eGFP circRNA jsou připraveny a různé dávky z nich (1ug, 2ug a 4ug) jsou přímo transfekovány do buněk 293T pro ověření, zda dokážou vyjádřit cílový bílek. Po 48 hodinách transfekce lze pozorovat jasný fluorescenční signál a intenzita fluorescence má dosažený efekt.
Lipo-circ_eGFP, složený z liposomu a nezabaleného eGFP circRNA, je použit jako kontrola.