Všechny kategorie
Transkripcese in vitro a cirkulace

Transkripcese in vitro a cirkulace

Pokud jde o dávkovou přípravu prekurzorů RNA, běžně používanou metodou je in vitro transkripce (IVT). Reakce IVT používá linearizovanou plazmidovou DNA obsahující T7 promotor jako šablonu a syntetizuje prekurzor RNA s nukleosid-trifosfáty (NTP) jako substrát v přítomnosti T7 RNA polymerázy.

Metody cyklikace in vitro zahrnují chemickou ligaci, enzymatickou ligaci a metodu permutovaného intron-exon (PIE). Chemická ligace a enzymatická ligace jsou vhodné pro cyklikaci kratších RNA. Pokud je fragment delší než 100 nt, rychlost cyklikace se výrazně sníží. Naopak metoda nukleáz založená na systému PIE může dosáhnout cyklikace sekvencí délky 8 kb.

Pod katalýzou guanosin-trifosfátu (GTP) dochází u struktury PIE ke cyklikaci extra-intronových sekvencí. Spojením s rozumnou strategií zvyšující rychlost cyklikace může Yaohai Bio-Pharma dosáhnout cyklikace sekvencí délkou až 4 kb s efektivitou více než 80 %.

undefined

Reakce cyklikace RNA in vitro probíhá následovně:

Předchůdce RNA je syntetizován in vitro transkripcí a komponenta PIE dokončí samo-splicing pod katalýzou GTP, aby vytvořila circRNA.

undefined

Detaily služeb
Proces Detaily služby Doba dodání (pracovní den)
Transkripcese in vitro a cirkulace Potvrzení reakčního systému 1-2
Reakce transkripcese in vitro a cyklizace
Destruckce RNase R
Optimalizace reakce Skladba reakce, optimalizace času 2-5
Naše funkce
    • Přísné navrhování a optimalizace testů

Lze dosáhnout cyklikace RNA až do délky 4 kb.

    • Vysoká účinnost cyklikace

Dosažitelnost míry cyklikace přes 80 % pomocí racionální strategie optimalizace sekvence.

    • Přísná kontrola RNase

Přes prostřednictví přísné kontroly RNasů v experimentálním prostředí a spotřebičích je účinně zabráněno degradaci RNA.

Případová studie

In vitro cyklikace a obohacování circRNA

Na základě systému PIE firma Yaohai Bio-Pharma optimalizovala sekvenci circRNA, s mírou cyklikace více než 80% podle elektroforeze v agárovém gelem (AGE). Pomocí RNase R se obohacuje circRNA, výsledky elektroforeze E-gel ukazují, že lineární RNA předchůdce je vyžehlen, a po dalším čištění lze odebrat většinu poškozené circRNA. Čištěcí roztok byl vyvinut vlastními silami Yaohai Bio-Pharma.

undefined

In vitro cyklikace a obohacování circRNA

Získejte zdarma nabídku

Get in touch