Význam asayu na měření účinnosti mRNA
S rychlým rozvojem vakcín a léčiv na bázi mRNA je potřeba specifické sady analytických metod pro testování účinnosti (definování jejich biologické aktivity), která zahrnuje překladovou efektivitu mRNA. Tyto metody jsou obvykle založeny na buněčném transfekci a funkčních asayech cílového bílkoviny.
Yaohai Bio-Pharma nabízí buněčné asayy na měření účinnosti pro látky mRNA nebo produkty LNP, včetně buněčné transfekce (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 buňky atd.) a ELISA nebo Western Blotting (WB) asayů.
Regulační požadavky pro asayy na měření účinnosti
Podle úvah WHO o regulaci „by měla být síla každé série konečné vakcíny určena pomocí vhodné kvantitativní a ověřené funkční metody. Potenciální in vitro testy na sílu mohou zahrnovat buněčné systémy pro transfekci nebo bezbuněčné asesy.“ A USP doporučilo „buněčný ases“ pro testování síly mRNA, tj. vyjádření cílového bílkoviny.
Postup
Krok 1. Buněčná transfekce s mRNA nebo mRNA-LNP
Buňky jsou kultivovány a transfikovány mRNA nebo mRNA-LNP. Detailně, mRNA je transfikována po smíchání s transfekčním reagentem, zatímco mRNA-LNP je přímo transfikována do buněk. Po 24-48 hodinách vycistěte supernatant s vyjádřeným bílkovinami centrifugací.
Krok 2. Funkční testy cílového bílkoviny
Provádějte ELISA nebo WB asesy pro posouzení funkčního vazby cílových bílkovin.
Případová studie
Buněčné testy účinnosti mRNA vzorků
Yaohai-BioPharma vyvinula buněčnou metodu testování účinnosti mRNA, která zahrnuje buněčné kultury, transfekci buněk a funkční asesy bílkovin. Transfikovali jsme eGFP mRNA, mCherry mRNA, luciferázu mRNA a mRNA šipkového proteinu do buněk 293T a detekovali cílové bílkoviny pomocí fluorescenčního, luminiscenčního nebo barevného signálu, WB, ELISA.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
