Beläggning av N-glykosyleringsställen är en fysiologisk egenskap hos glykoproteiner och producerar huvudsakligen N-glykan. Yaohai Bio-Pharmas N-glykosyleringsplatsbeläggningsanalystjänst utförs genom nedbrytning, frisättning, berikning och analys med hjälp av vätskekromatografi-elektrosprayjoniseringsmasspektrometri-masspektrometri (LC-ESI-MS/MS).
Vi har varit involverade i proteinstrukturkarakteriseringen av olika stora molekyler, inklusive rekombinanta subenhetsvacciner, nanokroppar/VHHs/enkeldomänantikroppar (sdAbs), antikroppsfragment, hormoner/peptider, cytokiner, tillväxtfaktorer (GF), enzymer, kollagener, etc.
Regulatoriska krav för beläggning av N-glykosyleringsplatser
Enligt ICH Q6B-riktlinjen, "för glykoproteiner bestäms kolhydratinnehållet (neutrala sockerarter, aminosocker och sialinsyror). Dessutom analyseras strukturen på kolhydratkedjorna, oligosackaridmönstret (antennär profil) och polypeptidkedjans glykosyleringsställen(er) i bästa möjliga utsträckning."
Analytisk metod
| Analys |
Metoder |
| Beläggning av N-glykosyleringsställen |
LC-MS efter diglykosylas och proteasspjälkning |
Förfaranden
1. Proteinnedbrytning av proteiner för att generera små peptidfragment.
2. N-glykanfrisättning med användning av endoglykosidas H eller PNGase F. Endoglykosidas H klyver bindningen mellan de två GlcNAc-resterna i kärnan av N-länkade glykaner, medan PNGase F är ett glykoamidas som bryter bindningen mellan GlcNAc och Asn, vilket frigör hela sockerkedja och omvandlar Asn till Asp med en massaökning på 1-Da.
3. N-glykopeptidberikning via HILIC (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography)
4. Analys av N-kopplad glykosyleringsplatsbeläggning med användning av LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEJ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
