Rekombinanta proteiner ser ofta oxidation av exponerade aminosyrasidokedjor, såsom tryptofan (Trp) och metionin (Met), vilket förändrar de fysikalisk-kemiska egenskaperna hos proteiner. Dessa förändringar kan i sin tur bidra till att förändra de biologiska funktionerna hos de påverkade proteinerna, såsom förlust av bindning, minskning av enzymatisk aktivitet, oväntat snabb clearance. Proteiner är viktiga mål för oxidativa reaktioner eftersom de reagerar snabbt med oxidanter och är rikliga i celler, extracellulära vävnader och kroppsvätskor.
Därför är övervakning av proteinoxidation avgörande för framgångsrik biofarmaceutisk utveckling.
Yaohai Bio-Pharma erbjuder aminosyraoxidationsanalystjänst, som låter dig bestämma aminosyraoxidationen med vätskekromatografi-masspektrometri (LC-MS).
Vi har varit involverade i proteinstrukturkarakteriseringen av olika stora molekyler, inklusive rekombinanta subenhetsvacciner, nanokroppar/VHHs/enkeldomänantikroppar (sdAbs), antikroppsfragment, hormoner/peptider, cytokiner, tillväxtfaktorer (GF), enzymer, kollagener, etc.
Regulatoriska krav för aminosyraoxidation
Enligt ICH Q6B-riktlinjerna kan oxiderade former detekteras och karakteriseras med kromatografiska, elektroforetiska och/eller andra relevanta analysmetoder (t.ex. High Performance Liquid Chromatography (HPLC), kapillärelektrofores, masspektroskopi, cirkulär dikroism).
Analytiska metoder
| Analys |
Metoder |
| Aminosyraoxidation |
LC-MS, omvänd fas högpresterande vätskekromatografi (RP-HPLC) eller hydrofob interaktionskromatografi högpresterande vätskekromatografi (HIC-HPLC) och masspektrometri |
Analytiska procedurer
1. Provberedning
2. LC-MS
3. Dataanalys
Tryptofan (Trp)-rester är särskilt benägna att oxideras på grund av den höga reaktiviteten hos den aromatiska indolen med reaktiva syreämnen. Trp-oxidation kräver viss exponering av Trp-rester som normalt är begravda i proteinets tredimensionella struktur.
Men när Trp-rester oxideras kan de omvandlas till en mängd olika produkter med mycket olika egenskaper än den ursprungliga Trp. Den vanligaste vägen för Trp-oxidation inkluderar bildningen av N-formylkinurenin (massskillnad: +32).
En annan vanligen oxiderad aminosyra är metionin. Svavelatomen i Met-resten kan acceptera antingen en eller två syreatomer vilket leder till bildning av sulfoxid (massskillnad: +16) eller sulfon (massskillnad: +32), på motsvarande sätt. Denna modifiering är relativt vanlig på grund av den typiskt höga ytexponeringen av Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEJ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
